殼寡糖單體的製備及表征

論文摘要

殼寡糖是殼聚糖水解產物，水溶性好，具有廣泛的生理學功能，在抗腫瘤，抑菌，抗氧化，調節血糖，降低血脂及生物材料中具有重要的套用價值。本研究利用實驗室自製殼聚糖酶水解高脫乙醯度殼聚糖製備殼寡糖，TLC，MALDI-TOF-MS分析製備殼寡糖的組成。自製寡糖聚合度主要分布在2-6，並含有少量更高分子量的殼寡糖。通過TLC，HPLC，MALDI-TOF-MS，簡單分析了殼聚糖酶水解作用模式。結果表明，該酶的酶切位點為GlcN-GlcN糖苷鍵，而不能作用於GlcNAc-GlcNAc位點。殼聚糖酶不能水解殼二糖，殼三糖和殼四糖，對殼五糖水解速率緩慢，可將其水解為殼二糖和殼三糖，對殼六糖可水解為殼三糖，因此控制酶水解底物的脫乙醯度和時間，可製備不同系列的聚合度高的殼寡糖。殼寡糖在抗腫瘤，抑菌方面的研究文獻中多有報導。但關於殼寡糖單體的理論及套用研究報導較少。這主要局限於殼寡糖單體的分離較為複雜，殼寡糖單體標準品價格昂貴。本文採用離子交換層析進行殼寡糖單體分離製備。選取具有離子交換和分子篩雙重功能的大孔強酸性聚苯乙烯離子交換樹脂作為分離介質，柱體積為600mL，洗脫體積為柱體積20倍，洗脫梯度為0.6mol/L-1.2mol/L，流速為300mL/h，每150mL收集一瓶。可以分離出殼二糖至殼六糖。採用TLC法，HPLC法，MALDI-TOF-MS法分析殼寡糖單體，結果表明，自製殼二糖，殼三糖，殼四糖，殼五糖純度較高，在95%以上。殼六糖純度稍低，在85%左右。研究了殼四糖，殼五糖，殼六糖對人肝癌細胞HePG-2、人肺癌細胞NCI-H460、人胃癌細胞MGC-803、人結腸癌細胞LOVO體外增殖實驗的影響。結果表明，三種殼寡糖在高濃度時，對腫瘤細胞均有一定的抑制作用。殼寡糖對腫瘤細胞的抑制與其聚合度有一定的關係。殼寡糖對肝癌細胞HePG-2的抑制作用隨著聚合度的增加而增強，對人胃癌細胞MGC-803的抑制作用隨著聚合度增加而降低。這可能與腫瘤細胞表面受體有關，具體的作用機理，需要進一步研究。採用瓊脂平板擴散法探討了氨基葡萄糖，殼二糖，殼三糖，殼四糖，殼五糖，殼六糖對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鰻弧菌、嗜水氣單胞菌四種細菌體外抑菌試驗。結果表明，殼二糖對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌有較強抑制作用。殼三糖對大腸桿菌，嗜水氣單胞菌有抑制作用。殼五糖對嗜水氣單胞菌有一定的抑制作用。其中殼二糖抑菌活性最強。殼寡糖單體的抑菌性是隨著分子量的降低而增強，這或許是分子量越小，越容易進入細胞壁的空隙結構內，干擾細胞的新陳代謝，以達到殺死細菌的目的。

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楊國寧. 殼寡糖單體的製備及表征[D].中國海洋大學,2012.

殼寡糖單體的製備及表征

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