《桿狀病毒-昆蟲細胞系統表達VLP和發展諾如病毒ELISA診斷方法》是依託西安交通大學，由王小琴擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：桿狀病毒-昆蟲細胞系統表達VLP和發展諾如病毒ELISA診斷方法
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：王小琴
- 依託單位：西安交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
在我國諾如病毒感染常見並有其特殊性，我們課題組前期的研究基礎表明我國諾如病毒的主要基因型為GII.3和GII.4。目前國際上諾如病毒的診斷主要依靠PCR方法，尚無可以廣泛推廣套用的ELISA診斷方法。本課題擬運用前期研究確定的諾如病毒GII.3和GII.4感染糞便標本，通過桿狀病毒-昆蟲細胞系統，表達針對我國諾如病毒主要基因型的VLPs；進一步採用製備的VLPs分別免疫動物產生多克隆抗體並純化；進而套用純化的多克隆抗體發展直接法、間接法、夾心法三種ELISA檢測方法，並用RT-PCR對三種方法的效果進行評價。以期建立適合我國諾如病毒感染檢測的一種敏感性和特異性較高的ELISA診斷方法，為諾如病毒感染所致急性胃腸炎暴發和嬰幼兒急性腹瀉糞便標本中病毒的檢測提供新的方法，為諾如病毒感染者免疫反應的研究和疫苗的研發奠定前期基礎。
結題摘要
本課題運用諾如病毒GⅡ.3 和GⅡ.4 感染糞便標本，通過桿狀病毒-昆蟲細胞系統，表達針對我國諾如病毒主要基因型的VLPs；進一步採用製備的VLPs 分別免疫動物產生多克隆抗體；進而套用純化的多克隆抗體發展三種ELISA 檢測方法，並用RT-PCR 對三種方法的效果進行評價。基本完成了實驗的預期計畫，成果：已發表SCI文章1篇，Pubmed收錄文章1篇，1篇SCI文章正在送審，此外還有1篇文章正在撰寫；培養了1名博士生，2名碩士生。 已發表論文2篇：SCI文章《Genetic Susceptibility to Norovirus GII.3 and GII.4 Infections in Chinese Pediatric Diarrheal Disease》，本研究收集了中國西安124例急性胃腸炎住院患兒的糞便、血清和臨床資料，同時收集相應的對照標本，糞便標本經RNA提取套用實時定量RT-PCR檢測諾如病毒。結果發現中國兒科腹瀉病毒感染中，諾如病毒基因型主要為GII.3和GII.4，並且弱的顯性分布不能完全保護兒童不受GII.3和GII.4的感染；Pubmed收錄文章《急性腹瀉住院嬰幼兒輪狀病毒和諾如病毒感染的臨床研究》，研究通過收集2009年4月至2010年5月間198例＜5歲的住院腹瀉患兒的糞便標本和臨床資料，同時收集53例非腹瀉患兒作為對照；採用酶聯免疫吸附法 (ELISA) 檢測A組HRV，實時定量RT-PCR方法檢測NoV，並對陽性標本進行病毒部分測序；對腹瀉患兒的腹瀉嚴重程度進行評分比較。結果表明單純A組HRV感染和單純NoV感染患兒間的腹瀉嚴重程度評分差異無統計學意義，A組HRV仍然是嬰幼兒腹瀉中最常見的病原體，而NoV則是第二大病原體，嬰幼兒中存在NoV隱性感染。NoV測序分析發現NoV病毒感染的主要基因型是GⅡ.3及GⅡ.4。此課題培養了1名博士生，2名碩士生：博士生蔡惠以優異成績畢業並留校工作，碩士生程麗在此期間參與並發表論文兩篇，目前就讀於香港中文大學，碩士生葉爾買克•唐沙哈爾順利畢業回新疆醫院腫瘤科工作。
