《核磁共振研究人源Mad2蛋白構象轉換中間態的溶液結構》是依託中國科學院合肥物質科學研究院，由孫紅賓擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：核磁共振研究人源Mad2蛋白構象轉換中間態的溶液結構
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孫紅賓
- 依託單位：中國科學院合肥物質科學研究院
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
紡錘體檢查點是一個細胞周期拯救系統，它阻止未成熟的姐妹染色單體分離，以確保染色體遺傳的正確性,防止非整倍體以及腫瘤細胞的形成。紡錘體檢查點蛋白Mad2 能夠與Mad1結合，形成Mad2-Mad1四聚體複合物，招募沒有生物活性的Open-Mad2到動粒並轉換構象形成具有生物活性的Close-Mad2，使之能夠與Cdc20結合，釋放到細胞質內，抑制APC的泛素連線酶活性，最終使細胞周期停滯。有證據表明，有中間態以二聚體的形式存在於Mad2的構象轉換過程中，其在Mad2行使功能時可能起到重要作用。對於這種處於溶液狀態的蛋白質中間態結構的研究，毫無疑問，核磁共振（NMR）技術是唯一的手段。本項目將套用分子生物學和生物化學方法對重組的Mad2進行表達、純化，套用核磁共振研究Mad2構象轉換中間態的溶液結構，揭示Mad2構象轉換的機制及其在行使紡錘體檢查點蛋白功能中的作用，並探索蛋白質摺疊機理。
結題摘要
本項目是套用分子生物學與生物化學方法在體外重組克隆、表達和純化Mad2蛋白，利用NMR研究O-Mad2與C-Mad2構象轉換中間態I-Mad2的溶液結構，初步揭示其構象轉換過程的結構生物學基礎，探索構象轉換過程中的蛋白質摺疊機制，尋求從分子水平進一步闡明O-Mad2與C-Mad2兩種不同構象在Mad2行使紡錘體檢查點蛋白功能中的重要作用。 我們完成了Mad2的克隆、表達和純化，組裝成功了I-Mad2-C-Mad2-MBP1蛋白複合物，得到了預期成果。但是，在表達2H的蛋白時遇到困難，無法進行後續的核磁共振實驗。隨後，我們調整了研究思路，用EPR研究Mad2蛋白的構象變化，並取得可喜的成果，文章被Science雜誌接收發表。另外，我們還做了一些抗菌肽方面的研究工作。 在項目執行過程中，我們取得了比較令人滿意的成果，我們共發表SCI論文3篇，接收一篇，在國核心心期刊發表綜述一篇，申請專利一項。此外，還提高了學生和科研人員的科研水平，鍛鍊了他們獨立做科研的能力。
