李痘病毒

李痘病毒：學名 Plum pox virus,異名 李樹病毒7（Prunus virus7）; 環面李痘病毒（Annulus pruni）; 李樹痘病毒（Sarka virus）,英文名 Plum pox virus 縮寫：PPV,分類地位 馬鈴薯Y病毒科馬鈴薯Y病毒組·

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基本介紹

• 中文名：李痘病毒
• 學名 ： Plum pox virus
• 異名 ： 李樹病毒7（Prunus virus7）
• 縮寫：PPV

簡介

環面李痘病毒（Annulus pruni）; 李樹痘病毒（Sarka virus）

英文名 Plum pox virus

分類地位 馬鈴薯Y病毒科馬鈴薯Y病毒組

分布

PPV最先於1915年在保加利亞發現，然後1936年在南斯拉夫，1941年羅馬尼亞發現，大約30年後PPV在大多數歐洲國家都發現，包括：阿爾巴尼亞、澳大利亞、保加利亞、賽普勒斯、前捷克斯洛伐克、埃及、法國、德國、希臘、匈牙利、義大利盧森堡、波蘭、葡萄牙、羅馬尼亞、西班牙、敘利亞、土耳其、英國、前蘇聯、前南斯拉夫。基於這種分布，PPV是典型的歐洲大陸的病毒，特別是中部和南部地區。根據該病毒的侵染症狀，紐西蘭的杏樹上也發現這種病毒。隨著植物材料的世界性分布，美國也面臨著PPV侵染的危險。

寄主植物

PPV能侵染很多木本科和草本科寄主。木本寄主包括李屬24個易侵染種類。能夠在一些很重要的經濟作物（包括李，杏，桃，櫻桃李，洋李）的葉子和果樹上引起痘泡症狀。最主要的自然寄主是Prunus spinosa，通常不出現任何症狀（Jordovi，Festi &Tankovi，1969）。起初認為PPV侵染僅僅局限於李屬，Sutic et al（1972a）認為Sorbus domestica是PPV的實驗寄主。但是van Oosten（1970，1971）發現，180種（28科）實驗植物中8科60種植物是新的寄主，其中有的是寄主植物，有的是園藝植物，包括寶蓋草（Lamiun amplexicaule）、Ranunculus arvensis，龍葵（Solanum nigrum）和百日草（Zinnia elegans）。

自然寄主範圍和症狀

洋李Prunus domestica栽培品種Poegaca（Kjustendilska sliva）、Hauszwetsche或Grosse Grüne Reneklode：葉片上出現嚴重的擴散淡綠環或斑駁，Po?egaca,Czar 和Hauszwtsche品種的水果會出現嚴重的痘泡症狀，果皮上出現深色的環，果肉出現紅色或淡紅色，果核帶棕色斑點，大約有90%果實在未成熟前落果。

桃（Prunus persica）：葉片出現黃化葉脈、褪綠斑點和畸形，果皮出現散布的淡黃色斑點。（Schuch，1962）

杏（Prunus armeniaca)：葉片出現散布的暗綠色斑和線，果實變形，果皮散布著壞死環，核上有黃色的環。（Németh，1964）

易受侵染的診斷寄主的種類及症狀：

菊葉香藜（Chenopodium foetidum）：葉片出現散布的帶黃色的或壞死的局部斑點。（Németh，1964）無系統症狀。

田野毛茛（Ranumvulus arvensis）：黃色的局部枯斑和系統的同心環（van Oosten，1970）。

Nicandra physalodes：黑棕色壞死枯斑。

Prunus domestica cvs Italian prune and pozegaca：褪綠環、條帶和斑點。

P．Japonica：萎黃斑。

P．Maritima：萎黃斑，葉脈壞死。

P．Sibirica：暗淡的線條。

P．Tomentosa：幼葉變形和偏上行，老葉褪綠斑和壞死斑。

Sorbus.domestica：黃斑，葉片萎黃。

不易侵染的診斷寄主的種類：

莧色藜（Chenopodium amaranticolor），Crataegus monogyna，Malus domestica, Prunus avium，Pyrus communis。

保存和繁殖寄主：

克利夫蘭煙（Nicotiana clevelandii），N.megalosiphon

鑑別寄主:

菊葉香藜是有效的局部枯斑寄主。

危害情況

樹痘病害在歐洲中部和東部的水果產區特別嚴重。在過去的十年中，PPV已傳播到一些地中海國家如埃及（Wetzel et al., 1991a;Mazyad et al. 1992)，西班牙和葡萄牙(Louro and Monte Corvo, 1986)。智利也有報導(Herrera et al. 1998)。

病毒侵染能引起嚴重的產量損失，在高感品種中損失可達到83%-100%(Kegler and Hartmann, 1998; Nemchinov et al. 1998a;Waterworth and Hadidi, 1998)。歐洲李會在成熟前落果，而日本李和桃果實會出現環斑，杏出現嚴重變形。甜櫻桃果實在成熟前落果並且葉子會出現褪綠壞死斑或壞死區(Nemchinov et al., 1998a)。然而病害的嚴重性在很大程度上受寄主是感病還是耐病品種的影響。

形態特徵

粒體線狀，有明顯的形態學上的長度，即長為660-770nm，寬為12.5-20nm。單鏈正義RNA，大小為3500kDa（Dunez and ?uti?，1965），占整個顆粒重量的7%，蛋白亞基3個，分別為：43.5KD，29.KD和27KD。

汁液中粒體穩定性

鈍化溫度（Tip）52℃-58℃，體外存活期（Liv）：20℃ 3-4天，稀釋限點：10-3-10-5。

物理性質

沉降係數180S，A260/A280=0.77-0.87

病毒提純

病毒分離物的選擇是很重要的，不同的分離物在感病組織中濃度有很大的差異。以下兩種提純病毒方法會得到較好的效果。

1． Schade（1969）100g系統侵染的克立夫蘭菸葉片在300毫升去離子水中（含0.3%w/v抗壞血酸，0.01M二乙基二硫代氨基甲酸鈉（DIECA））中勻漿，再加同體積預冷的氯仿一起搖動5分鐘，1000g離心15分鐘，取液相，以5000g15分鐘，再取液相，高低速離心一次，使病毒濃縮，以0.05M，pH8.2的硼酸緩衝液重新懸浮病毒，通過寄主特異的抗血清吸附作用去掉植物蛋白。

2． Rankoric&Jordovic（1970）在接種15-20天后採集系統侵染的菊葉香藜葉片，置於4℃冰櫃中冷卻，每100g葉子用含0.01M DIECA和0.02M巰基乙酸的pH7.0的100毫升0.02ML磷酸緩衝液以及15毫升二乙醚和15毫升四氯化碳的混合液進行研磨。以2000g離心10min，保留液相，經兩次差速離心濃縮病毒，然後再進行蔗糖密度梯度離心進一步濃縮病毒。

傳播途徑

流行學

蚜蟲傳播李痘病毒依賴於以下幾個因素：侵染源，介體類群大小，易受侵染的植物和侵染源的距離。例如10年時間PPV能使距離100米的健康植物100%的受侵染，而距離500-800米，只有1.5%的植物受侵。這些數據說明如果要在已受PPV侵染的地區建立新的種植園需要必要的空間隔離。了解傳播介體和病毒株系之間的關係對病害的流行是重要的。介體傳毒能力因株系的不同而有很大的差異(Massonie and Maison, 1976)。實驗證明，桃蚜能傳播全部病毒株系，對壞死和中間株系有24.5%的傳毒效率，而對黃化株系則只有8%的傳毒效率。介體的作用受到病毒寄主是否適合蚜蟲取食和繁殖的影響。

PPV汁液摩擦接種只適合於實驗目的，自然界中不能通過剪枝和嫁接工具傳播。

種子在李樹中是否傳毒目前還沒有定論。

運動及散布

這種病害隨機分布於果園中。2-3年後傳染開始由第一棵感病樹木擴散。如果所用材料不是無毒材料，嫁接傳播能明顯加速病害在感病區的擴散。地區或國家之間病毒的傳播大多是由可能感病的植物材料造成的(Diekmann and Putter, 1996)。美國從東歐進口的果樹材料有時侯會檢測到PPV(Waterworth, 1994)。

PPV污染花粉囊在病毒的傳播也可能有潛在的作用（Levy et al., 1995），然而這種可能性在實踐中還沒有被證實。

檢疫與防治

檢測方法

儘管病毒在樹木中的分布不規則，但是可通過症狀特別是生長活躍期的症狀進行檢測。將芽接種到易感病的指示植物（桃或Prunus tomentosa）後6-8周可觀察症狀(ISHS, 1983, 1992, 1998;OEPP/EPPO, 1983)。機械摩擦接種菊葉香藜或豌豆也可在6-8天后出現症狀。

ELISA，用於檢測發現PPV廣泛存在於根，樹皮，花，葉子，果實或種子中(Adams, 1978)。

這種方法已被定量套用(Himmler et al., 1987)。

電鏡檢測方法即免疫電鏡(Kerlan et al., 1981)和膠體金標記技術(Himmler et al., 1988)也得到套用。

單克隆抗體能有效的區分不同的株系(Cambra et al., 1994;Boscia et al., 1997;Candresse et al., 1998)。

以同位素標記DNA或RNA的分子雜交技術， 以非放射性的DIG標記的PPV c RNA 也套用於病毒的檢測(Nemchinov et al., 1996)。

PCR大大提高了檢測的靈敏度，提純病毒的RNA可檢測到10fg (Wetzel et al., 1991b)。免疫-PCR檢測PPV也有很高的靈敏度(Wetzel et al., 1992。Candresse et al., 1994, 1998)。與IC-PCR相似的技術還有印記捕獲PCR，不需研磨樣品就可以檢測病毒，並且在捕獲階段可用許多蛋白替代PPV特異的免疫球蛋白(Olmos et al., 1996, 1998;Cambra et al., 1998;Candresse et al., 1998);

RT-PCR特異性檢測PPV3'非編碼區的保守序列，這可能要利用了病毒核酸的提取和純化。(Levy and Hadidi, 1994;Levy et al., 1994)。

PCR特異性檢測PPV株系差異技術已建立起來。Candresse et al. (1998)已設計兩對引物擴增和分離PPV的亞組D和亞組M。另外Nemchinov and Hadidi (1998a)已設計擴增PPV-C的特異引物。

防治

新建立的種植園必須採用無病毒的繁殖材料，這是防治PPV的首要步驟。經溫熱療法產生的苗子的頂芽嫁接到無毒砧木上也是健康的母本材料。木本科和草本科的指示植物可以用於檢測PPV。酶聯免疫吸附（ELISA）和免疫吸附電鏡都能有效的檢測PPV，且靈敏度較高。

雖然病毒的自然傳播不能完全控制，但可以通過一定的措施降低。其中最重要的是在周圍沒有侵染源的地區種植，因為在侵染地區很可能被蚜蟲傳播侵染。所有受侵染的李、櫻桃李、杏等李屬寄主都應該在果園建立之前徹底消滅。這一措施特別適用於在輕度感染地區建立新的李樹園。

防治蚜蟲以控制病毒傳播是保護苗圃、新建的李樹園和發病較輕的地區的不可缺少的措施。隔離措施可能有助於防治病毒傳播。

雖然這些措施都是不可缺少的，但是依目前條件，它們不能完全防止PPV的侵染。抗病和耐病的植物為這一問題提供了很好的解決方法。對前南斯拉夫和其它國家的調查研究發現許多抗PPV或耐PPV的李栽培種，其中有些在嚴重發病的地區生長。它們的套用還依賴於果實品質、對環境和土壤的適應性等因素。抗病和耐病的李栽培種和克隆是培育新的雜交種的重要的基因材料。

註：李痘病毒、李偽痘病毒和李紋斑病毒所引起李屬植物的症狀有時十分相似。李痘病毒經常與杏壞死環斑病毒或杏矮縮病毒一起混合侵染。為了區別這些病毒，必須用幾種植物進行試驗。建議適用下列植物：

青葙（Celosia argentea）

菊葉香藜,歐洲甜櫻桃,洋李,櫻花（Prunus serrulata）,Shirofugen品種