星號活性(star activity) :也稱星活性，同一類限制性內切酶在某些反應條件變化時酶的專一性發生改變，例如酶濃度過高、反應液離子強度過低、PH 改變、反應液中Mg2* 被Mnt 代替有機溶劑影響時等，酶切割位點專一性發生改變。這個特性稱為星號活性，在這些酶製劑的包裝和產品說明書上註明，以表示區別，提示使用者注意。
在非理想的條件下，內切酶切割與識別位點相似但不完全相同的序列，這一現象稱星號活性。有人提出，這種"星號"活性可能是內切酶的一種普遍特性（1），如果提供給相應反應條件，所有內切酶都會出現非特異性切割。NEB已證實下列酶存在星號活性：Apo I（2）、Ase I（2）、BamH I（3）、BssH II（2）、EcoR I（4）、EcoR V（5）、Hind III（1）、Hinf I（6、7）、Pst I（8）、Pvu II（9）、Sal I（8）、Sca I（2）、Taq I（10）、Xmn I（2）。
基本介紹
- 中文名：星號活性
- 形成：內切酶切割與識別位點相似的序列
- 推測：可能是內切酶的一種普遍特性
- 造成因素：較高的甘油濃度
- 方法抑制：儘量用較少的酶進行完全消化反應
- 造成因素：酶與底物DNA比例過高
性能含義,導致因素,抑制方法,
性能含義
酶識別特異性的改變受酶本身的性質及可能引起星號活性的反應條件影響。常見的引起酶識別改變的條件有：單鹼基替換、識別序列外側鹼基縮短以及單鏈切刻（10）。Polisky等（4）對EcoR I的早期研究表明，在低鹽濃度、高pH值條件下，EcoR I可能切割N/AATTN序列；最近，Gardner等（11）的研究表明，只要識別中心的四鹼基序列（AATT）不出現A/T替換，EcoR I可以切割其它任何單鹼基替代序列。
大多數星號活性是可以控制的，做酶切反應時一般不考慮這方面的因素。只要在正常條件下，使用隨酶提供的NEBuffer，NEB的酶就不會出現星號活性。下面列出了導致或抑制星號活性的因素。
導致因素
較高的甘油濃度（>5% v/v）；
酶與底物DNA比例過高（不同的酶情況不同，通常為>100 U/µg）；
低鹽濃度（<25 mM）
高pH值（>pH 8.0）
用其他二價離子替代鎂離子（如Mn++，Cu++，Co++，Zn++等）
以上因素的影響程度因酶的不同而有所不同。例如EcoR I比 Pst I對甘油濃度更敏感，而後者則對高pH值更敏感一些(2)。
抑制方法
儘量用較少的酶進行完全消化反應。這樣可以避免過度消化以及過高的甘油濃度。
儘量避免有機溶劑（如製備DNA時引入的乙醇）的污染。
將離子濃度提高到100-150 mM（若酶活性不受離子強度影響）。
將反應緩衝液的pH值降到7.0。
二價離子用Mg++。
