《日本血吸蟲肺期童蟲與宿主相關基因的功能研究》是依託武漢大學，由董惠芬擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：日本血吸蟲肺期童蟲與宿主相關基因的功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：董惠芬
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
宿主因子影響血吸蟲的生長發育、營養代謝、免疫逃避等諸方面。本研究以國家自然科學基金項目(No:30771876)資助下建立的日本血吸蟲肺期童蟲與宿主細胞共培養體系及篩選出的與宿主相關差異基因為基礎，重點研究其中的鈣連蛋白(Canx)、腺苷激酶1(AK1)、生長激素誘導的跨膜蛋白(GHITM)、程式性死亡蛋白10(PCDP10)基因表達產物在血吸蟲童蟲中的分布及其對生長發育的影響；酪蛋白激酶(CK)基因功能及其產物與宿主細胞的相互作用；組織蛋白酶L(CL)和3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因表達及其在逃避宿主免疫過程中的作用，揭示日本血吸蟲童蟲的生長發育機制及其與宿主的相互關係，闡明肺期童蟲免疫逃避的分子機制，為血吸蟲病診斷、抗蟲藥物的篩選與疫苗研究提供新線索，為共培養體系在血吸蟲分子生物學、基因功能及其與宿主的相互關係等研究中的套用提供科學依據，開創血吸蟲病研究的新局面，具有重要意義。
結題摘要
宿主因子影響血吸蟲的基因表達、生長發育與免疫反應等諸方面。本研究以上一個國家自然科學基金(No:30771876)資助下建立的日本血吸蟲肺期童蟲與宿主細胞共培養體系及篩選出的與宿主相關差異基因為基礎，克隆表達了其中的鈣連蛋白(CANX)、腺苷激酶1(AK1)、程式性死亡蛋白10(PCDP10)、生長激素誘導的跨膜蛋白(GHITM)、酪蛋白激酶2α(CK2α)、組織蛋白酶L(CL)和3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)等7個基因以及文獻報導的脂肪酸結合蛋白（FABP）、谷胱苷肽-S-轉移酶（GST）等2個差異基因的產物，獲得了其免疫血清。螢光定量檢測了其中7個基因在日本血吸蟲各發育階段的表達，其中AK1、GST、GAPDH基因在蟲卵期表達量最高，FABP、PCDP10基因在雄蟲中表達量最高，CANX及GHITM基因在肺期童蟲中表達最高。免疫組化定位了其中6個基因在蟲體中的分布，其中AK1、PCDP10及GAPDH主要位於蟲卵、雌蟲卵黃腺及被膜下；FABP主要位於雌蟲卵黃腺及被膜下；GST主要位於雄蟲的實質區域及雌蟲卵黃腺之間的實質細胞內；CK2α主要位於童蟲蟲體表膜及實質細胞。研究了其中6個基因重組蛋白的免疫保護性，其中AK1、FABP和GAPDH免疫小鼠後，可導致小鼠分別獲得50%、36%、47%的減蟲率及40%、39%、52%的減卵率，與對照比較差異顯著（P＜0.05）；誘導產生的Th1型細胞因子IFN-γ也顯著升高（P＜0.05）；但GST、PCDP10、CK2α與對照組的差別不大。其中5個基因的RNA干擾結果顯示，AK1、FABP和GAPDH可使雌蟲產卵數減少32%、52%、43%，與對照比較差異顯著（P＜0.05），GST、PCDP10無差別；但PCDP10對蟲卵質量有影響，PCDP10與AK1基因表達被抑制後，蟲體細胞包括卵黃細胞的凋亡顯著增加，體被結構受損，不僅延緩了童蟲的生長發育，而且影響了卵殼的形成及卵胚的發育以及雌蟲的產卵。初步揭示了日本血吸蟲AK1、PCDP10對童蟲發育與成蟲產卵影響以及AK1、FABP和GAPDH產生保護性免疫的機制，為深入研究CANX與GHITM在血吸蟲生長發育、SjCK2α與宿主的相互作用以及GAPDH、CL逃避宿主免疫中的作用奠定了基礎，為揭示血吸蟲生長發育機制與疫苗的研究提供了新線索。
