《日本血吸蟲疫苗分子的篩選和病毒樣顆粒疫苗的構建》是依託同濟大學，由徐新東擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：日本血吸蟲疫苗分子的篩選和病毒樣顆粒疫苗的構建
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：徐新東
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
血吸蟲病是嚴重危害人類身體健康的重大寄生蟲病。疫苗是預防血吸蟲感染最理想的方法，但目前與血吸蟲免疫保護相關的關鍵抗原尚需進一步鑑定，疫苗構建方法也有待改進。分泌蛋白在血吸蟲與宿主的相互作用中發揮多方面的作用，是重要的抗原庫。申請人前期克隆了204個日本血吸蟲分泌蛋白，並通過高通量篩選技術鑑定到了數個診斷分子。本課題將利用此技術，比較輻照致弱尾蚴免疫和正常尾蚴感染小鼠後免疫應答差異，鑑定與體液免疫保護相關的抗原；獲得的陽性抗原，再通過軟體預測T細胞表位並經實驗驗證，進一步篩選能刺激CD4+T細胞分泌IFN-γ的疫苗候選分子。疫苗候選分子將嵌合表達在人乳頭瘤病毒16主要衣殼蛋白L1上，在體內或體外模擬病毒顆粒組裝條件，製備日本血吸蟲病毒樣顆粒疫苗，並在小鼠中評估該疫苗的保護效果與機制。本課題預期結果不僅能闡明分泌蛋白在血吸蟲免疫保護中的作用，而且為血吸蟲病疫苗的研製提供新思路。
結題摘要
日本血吸蟲病仍然是嚴重危害我國人民健康的重大寄生蟲病，疫苗是預防血吸蟲感染的有效方法，但尚需鑑定高效的疫苗分子和創新疫苗構建方法。本研究中，我們建立了致弱尾蚴免疫和正常尾蚴感染小鼠模型，利用GST融合日本血吸蟲分泌蛋白抗原篩選技術，比較了兩種模型中不同分泌蛋白的特異性抗體水平，從中鑑定到10個抗原的抗體在致弱尾蚴免疫血清中顯著升高。我們對其中6個抗原進行了重組表達，並在小鼠中評價了其免疫保護研究。這6個抗原均能誘導較強的免疫應答，但免疫保護水平和對照組相比無顯著差異。為了提高抗原的免疫保護效果，我們選擇其中一個抗原SjSP-13，將其嵌合表達在HPV 16 L1蛋白中，在酵母中表達製備重組蛋白，並通過自組裝得到SjSP-13/ HPV-16 L1擬病毒顆粒。透射電鏡表明，擬病毒顆粒大小在50nm左右。我們在小鼠中比較了擬病毒顆粒和SjSP-13單分子重組蛋白的免疫原性和誘導的免疫保護效果。擬病毒顆粒免疫組SjSP-13特異抗體滴度為766,000 ± 38,807，高於重組蛋白組(662,000 ± 50,040)，但差異不顯著。尾蚴攻擊感染實驗表明，擬病毒顆粒免疫組平均蟲荷為23.4 ± 1.3，顯著低於重組蛋白組(29.8 ± 1.3)和弗氏佐劑組(32.4 ± 1.6) (p<0.05)；擬病毒顆粒組平均肝臟蟲卵EPG (Eggs per gram)為22,500 ± 866，顯著低於重組蛋白組(33,300 ± 2,267)和弗氏佐劑組(37,300 ± 2,131) (p<0.05)；重組蛋白組的成蟲負荷和蟲卵EPG與弗氏佐劑組相比無顯著差異。以上結果表明，SjSP-13/HPV-16 L1 擬病毒顆粒誘導的免疫保護效果顯著高於SjSP-13單分子重組蛋白，提示構建病毒樣顆粒疫苗是提高血吸蟲抗原免疫保護效果的有效方法。
