新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸檢測試劑盒是用於快速進行體外定性檢測新型冠狀病毒(RdRp基因、N基因、E基因)的體外診斷試劑。
基本介紹
- 中文名：新型冠狀病毒(2019-nCoV)核酸檢測試劑盒
- 外文名：NewCoronavirus (2019-nCoV) Nucleic Acid Detection Kit
- 管理類別：Ⅲ類醫療器械
簡介,主要組成成分,適用的受檢人群,檢測方法,檢測原理,檢測流程,檢測結果的判斷要求,檢測結果解讀,檢測報告,注意事項,
簡介
主要組成成分
2019-nCoV-PCR-反應液、2019-nCoV-PCR-酶混合液、2019-nCoV-PCR-陽性對照、2019-nCoV-PCR-陰性對照。
適用的受檢人群
新型冠狀病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要進行新型冠狀病毒感染診斷的人員。
檢測方法
1．RNA恆溫擴增-金探針層析法
採集咽拭子標本，對標本中的脫落細胞進行裂解，裂解釋放出的病原體RNA在逆轉錄酶和T7 RNA聚合酶的作用下，經過逆轉錄和轉錄過程，實現病毒RNA的T7核酸擴增。擴增產物加入30ul新型冠狀病毒檢查液中，與特異探針雜交，最後，將混合液全部滴加至檢測卡樣孔內，通過層析顯色讀取結果。
2. 實時螢光PCR
實時螢光PCR是一種快速簡便、成本較低、且已在臨床廣泛使用的感染性病原體核酸檢測技術。新型冠狀病毒2019-nCov屬RNA病毒，PCR擴增前需要先進行逆轉錄反應(RT)，商品化試劑盒通常把RT反應液與PCR反應液預混在一起，一次性完成逆轉錄和擴增檢測的全部過程，操作簡便且明顯降低逆轉錄後開蓋易導致污染的風險。（以下介紹核酸檢測以螢光PCR法為主進行相關闡述）
檢測原理
所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是一種僅含有RNA的病毒，病毒中特異性RNA序列是區分該病毒與其它病原體的標誌物。新型冠狀病毒出現後，針對新型冠狀病毒進行全基因組序列的解析，並通過與其它物種的基因組序列對比，發現了新型冠狀病毒中的特異核酸序列。臨床實驗室檢測過程中，如果能在患者樣本中檢測到新型冠狀病毒的特異核酸序列，那么就可以認為樣本中存在病毒(已經感染)，應提示該患者可能被新型冠狀病毒感染。反之表明樣本中沒有病毒(未感染)。
檢測流程
因為新型冠狀病毒的高傳染性，目前臨床上都會對樣本先滅活再檢測，並且滅活方式多樣，可以依據產品的情況採用加熱的方式進行滅活，也可以直接放入帶有滅活成份保存液中。
- 樣本採集
根據試劑盒說明書“樣本要求”部分進行樣本採集，常規的樣本類型包括(口)咽拭子、鼻(咽)拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液或其他呼吸道分泌物等樣本。由於新型冠狀病毒為RNA病毒，RNA易降解，因此採集樣本時應使用無RNA酶的拭子和無RNA酶的儲存管。
2. 樣本保存、轉運
獲得患者樣本後，需儘快進行檢測。如無法立即檢測需要轉運，應按照說明書對樣本進行低溫封裝，並儘快送到專門的檢測機構進行檢測。
- 樣本核酸的提取
檢測機構收到樣本後，對樣本進行核酸提取，核酸提取試劑應使用批准產品說明書中指定的核酸提取試劑盒。
4. 樣本檢測
病毒RNA需要首先逆轉錄為cDNA，再進行擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批准產品說明書中指定的螢光定量PCR儀，通過螢光定量PCR所得到的樣本Ct值的大小，可以判斷患者樣本中是否含有新型冠狀病毒。
檢測結果的判斷要求
目前批准的產品均基於新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框1a/b(Open Reading Frame 1ab，ORF1ab)、包膜蛋白(Envelope Protein，E)和核衣殼蛋白(Uucleocapsid Protein，N)進行選擇。不同產品的檢測原理基本一致，但是其引物、探針設計存在不同，有單靶區段(ORF1ab)、雙靶區段(ORF1ab、N蛋白)、三靶區段(ORF1ab、N蛋白和E蛋白)的檢測和判讀差別。建議使用者應嚴格按照不同企業說明書規定的判讀方式進行判讀。
依據《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第五版)》確診病例要求，臨床診斷病例或疑似病例具備以下病原學證據之一者即為確診病例。
1. 呼吸道標本或血液標本實時螢光RT-PCR檢測新型冠狀病毒核酸為陽性。
2. 呼吸道標本或血液標本病毒基因測序，與已知的新型冠狀病毒高度同源。
檢測結果解讀
實驗室要確認某病例為陽性，須滿足以下條件：同一份標本中新型冠狀病毒至少2個靶標(ORF1ab/N/E)、實時螢光RT-PCR檢測結果均為陽性。
如一個靶標陽性或檢測結果落在灰區的標本需複測，且儘可能用另一種試劑復驗，仍然可疑則須重新採樣(包括不同部位及樣本類型)進行檢測。
陰性結果也不能完全排除新型冠狀病毒感染，需要排除可能產生假陰性的因素，包括：樣本質量不合格，樣本收集得過早或過晚，沒有正確地保存、運輸和處理樣本，方法學視窗期，技術本身存在的原因如病毒變異、PCR抑制等。
檢測報告
核酸檢測報告必須規範，要以臨床醫師能夠正確理解和套用的方式報告結果，至少涉及以下要素。
1. 報告要及時，需向臨床明確檢測周轉時間(Turn-Around Time, TAT)。
2. 報告內容須完整，包括患者信息，標本信息(種類、唯一編號及其質量)，檢測信息(靶點、方法、試劑/儀器)，採樣、接收、檢測和報告時間，送檢單位/檢測實驗室及聯繫方式等。
3. 報告上明確標出“檢出限”(不可混用為參考值/參考區間；應根據試劑盒說明書及性能驗證結果來確定；不同試劑盒會存在差異)。
4. 報告方式：不報告為“陰性”、“陽性”。
(1)陰性結果報告為“未檢出”或“低於檢出限”，同時應備註“未檢出”的可能原因：方法學局限性，標本採集時機，標本採集/運輸/儲存/檢測等環節的問題等。
(2)陽性結果報告為“檢出”並標出具體靶標。
(3)“可疑結果”描述為：1個靶點陽性，或檢測結果低於檢出限但有擴增反應(在灰區)，已復驗，建議重新採樣檢測。
5. 必要時，結合實驗室其他指標尤其是血清學免疫指標(如有)進行綜合分析，給出相應的解釋或建議。
注意事項
1. 核酸檢測的整個檢測流程操作複雜，不同產品因存在不同反應體系及適用機型等因素，操作過程中試驗人員應按照各自產品說明書要求進行。保證樣本的檢測準確，應從患者樣本的採集開始進行質量控制，並對後續各個流程規範操作(如樣本的保存、轉運等)。
2. 新型冠狀病毒傳播能力強，危險係數高，個人防護應為生物安全三級實驗室級別。每個操作人員必須具備專業技能且擁有PCR檢驗資質。整個操作過程中需防範氣溶膠污染對人員的感染風險，並做到準確加樣和正確使用試劑和耗材。
3. 為防止病毒擴散，檢測新型冠狀病毒的實驗室必須達到生物安全二級(P2)及以上實驗室條件，實驗室管理應嚴格按照PCR基因擴增實驗室的管理規範，實驗操作必須嚴格分區，各區域使用的儀器、設備、耗材和工作服必須專用，不得交叉使用，避免污染。
4. 樣本操作、廢棄物處理均需符合衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通用準則》和《醫療廢物管理條例》等相關法規要求。
