《排毒保腎方調控TGF-β1/整合素信號途徑對腎纖維化的影響》是依託華中科技大學，由劉建國擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：排毒保腎方調控TGF-β1/整合素信號途徑對腎纖維化的影響
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉建國
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腎小管間質纖維化是導致終末期腎病的主要病理基礎，決定慢性腎臟病患者的病程和預後，因此抑制腎纖維化的有效藥物急盼問世。我們課題組前期探討了腎小管上皮細胞-腎間質肌成纖維細胞轉分化（TEMT）中TGF-β1/Smad通路外新的信號通路機制，發現TEMT過程中TGF-β1與整合素信號通路通過粘著斑激酶相互作用。因此對於整合素信號途徑的調控可能成為抑制腎纖維化的新靶點。課題組遵去菀陳莝法創立排毒保腎方，經臨床實踐發現該方可降低慢性腎功能不全患者血清纖維化指標。本課題在此基礎上，以單側輸尿管梗阻製作的大鼠腎間質纖維化模型和人近端腎小管上皮（HKC）為研究平台，採用誘導或阻遏基因表達、Real-Time PCR、Western blot、雷射共聚焦顯微技術等方法，對比分析排毒保腎方是否通過調控TGF-β1/整合素信號途徑影響腎纖維化，以明確該方抗腎纖維化的作用靶點，為其推廣套用提供實驗依據。
結題摘要
第一部分 排毒保腎方主要水溶性成分之一丹酚酸B對人腎小管上皮細胞轉分化過程的干預效應與機制研究 用TGF-β1刺激HK-2，用排毒保腎方主要水溶性成分之一丹酚酸B（SA-B）、ERK抑制劑PD98059及鈣通道拮抗劑Nifedipine處理；於不同時間段分用免疫螢光、S-P法和免疫印跡的方法檢測FAK、整合素β1。 結果顯示：1. 相比空白組TGF-β1成功誘導HK-2轉分化；2. TGF-β1刺激15min後FAK-Tyr397磷酸化增強,60min達頂峰。相比TGF-β1對照組，PD98059使FAK-Tyr397的磷酸化減弱而Nifedipine無明顯抑制作用，PD98059與Nifedipine協同作用明顯，SA-B具有同樣抑制作用；3. 相比對照組,PD98059、SA-B使FAK蛋白表達呈時間依賴性減弱, PD98059與Nifedipine協同作用明顯；4. PD98059及Nifedipine均呈時間依賴性抑制β1-Integrin表達，兩者協同作用明顯；SA-B有效抑制β1-Integrin表達。 第二部分 排毒保腎方主要水溶性成分之一β欖香烯對TGF-β刺激的HMC表達CTGF和FN的影響 將HMC分為6組（空白對照組，TGF-β刺激組，低、中及高濃度β欖香烯組，秋水仙鹼干預組），結果顯示β欖香烯能抑制TGF-β誘導的腎小球系膜細胞增殖並下調該細胞CTGF和FN的表達。 第三部分 TGF-β/整合素信號通路與腎纖維化的關係及排毒保腎方的干預效應 將24隻大鼠隨即分為UUO模型組，假手術組和排毒保腎方治療組。結果顯示模型組TGFβ1、整合素α5β1、α-SMA 及E-cadherinmRNA與蛋白表達明顯增多，排毒保腎方可下調其表達； 第四部分 排毒保腎方含藥血清對TGF-β1刺激的人腎小管上皮細胞表達α-SMA及CTGF的影響 體外培養HKC，結果顯示：經TGF-β1誘導48h後，單純干預組α-SMAmRNA表達較正常對照組顯著增加，而不同劑量含藥血清均可抑制α-SMAmRNA表達。隨著排毒保腎方含藥血清劑量升高，α- SMAmRNA表達量呈下降趨勢。單純TGF-β1干預組CTGF蛋白表達水平較正常對照組顯著增加，其中，高、中、低劑量含藥血清組CTGF蛋白表達水平依次為2.50±0.577、3.50±1.00、5.00±0.82。
