《抗原決定簇表面印跡製備多肽印跡分離萃取材料》是依託南開大學，由董襄朝擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：抗原決定簇表面印跡製備多肽印跡分離萃取材料
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：董襄朝
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
標誌性蛋白以及內源性多肽分析是功能蛋白組學和生命科學的重要研究內容。為了進行可靠的分析及鑑定，必須對於低豐度的目標多肽進行富集，由於生物抗體製備複雜、化學穩定性差，以新型分離材料取代生物抗體是研究工作者追求的目標。 分子印跡可以被用於製備類似抗體的分離材料，在蛋白類分子的印跡中，以分子的抗原決定簇為印跡模板並進行表面印跡，具有方便製備、結合位點可近性好的優點，是具有潛力的印跡方法，但目前的文獻方法存在很多局限性。本項目將以發展抗原決定簇和限於表面印跡方法為目標，通過以賴氨酸乙醯化肽為目標分子的印跡合成，探討抗原決定簇結構與材料選擇性的關係，研究抗原決定簇印跡方法的規律，並通過二維核磁方法分析識別機理，為蛋白類分子印跡的合理設計提供依據，同時將探討以矽膠為硬模板合成介孔印跡材料方法。本項目將為多肽選擇性富集新材料的研究、分子印跡技術的發展以及生命科學研究中的多肽分析作出貢獻。
結題摘要
標誌性蛋白以及內源性多肽分析是功能蛋白組學和生命科學的重要研究內容，以新型合成分離材料取代生物抗體，用於複雜體系的富集分離是研究工作者追求的理想目標。分子印跡是用於製備具有識別功能的分離材料的先進技術，分子印跡聚合物（MIP）在生物分子分析中套用具有重要意義，生物分子印跡仍是分子印跡研究的難點，也是分子印跡的研究重點之一。 本項目的研究目標是合成新型的套用於蛋白後修飾及多肽標記物分析的印跡材料、發展新的生物分子印跡合成方法。工作中選擇了三類分子：賴氨酸乙醯化肽、組蛋白H4-K16乙醯化標記物以及一種內源性癌症標誌蛋白（β2-微球蛋白）為目標分析物進行研究，製備了具有選擇性及分離能力的分子印跡聚合物，探討了抗原決定簇結構與材料選擇性的關係，研究了抗原決定簇印跡方法的規律。 在研究工作中，通過分析目標分子的結構，選擇了可作為抗原決定簇的序列為印跡模板，以限於表面印跡方法進行了MIP的製備，並對於選擇性及識別機理進行了探討。研究證明，所得到的印跡聚合物均具有很好的識別能力以及抗原決定簇親和能力，可以選擇性結合具有相同抗原決定簇而其它胺基酸殘基不同的化合物。研究證明： 1.在選擇合適條件情況下，乙醯化賴氨酸側鏈可以用於分子印跡，得到的MIP可以區別修飾後及天然賴氨酸的不同側鏈，可以選擇性結合帶有賴氨酸乙醯化的不同多肽，用於這類多肽的分離富集，由此可以推測，以帶有後修飾側鏈的胺基酸為印跡模板，所合成的MIP具有套用於蛋白翻譯後修飾研究的潛力。 2.在一定的緩衝液中進行印跡，可以得到以氫鍵和離子鍵為相互作用的印跡結合位點，有利於生物分子的印跡及生物環境中分離富集。 3.結合HPLC的研究及圓二色分析結果說明，多肽分子在不同溶液中的構像不同是其在不同溶液中結合常數不同的原因。 4. 以乙醯化賴氨酸印跡聚合物（KacA-MIP）或H4-K16乙醯化肽段印跡聚合物為吸附材料，對於蛋白酶解液中的含有乙醯化賴氨酸的幾種多肽或H4-K16乙醯化肽段進行提取，回收率達到80%以上。 以上研究結果為生物分子的抗原決定簇印跡研究提供了信息及經驗，對於這項研究的發展做出了貢獻。
