《抗卵巢癌融合蛋白IL-12-6B11ScFv的真核表達及功能研究》是程洪艷為項目負責人，北京大學為依託單位的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：抗卵巢癌融合蛋白IL-12-6B11ScFv的真核表達及功能研究
- 項目類別 ：青年科學基金項目
- 項目負責人：程洪艷
- 依託單位 ：北京大學
結題摘要,項目摘要,
結題摘要
目的： 6B11是我中心製備的卵巢癌抗獨特型單抗，能夠模擬卵巢癌抗原CA166-9，誘導機體產生特異性抗卵巢癌細胞免疫和體液免疫。IL-12是目前發現的對體內免疫細胞作用最強、最廣的細胞因子，主要作用於T和NK，促進CTL和LAK活性，提高IFN-γ和IL-2生成，有明顯的抗腫瘤作用。本研究採用基因工程技術將6B11單鏈可變區基因與鼠IL-12融合併進行真核表達，深入研究融合蛋白的免疫及生物學功能，為臨床套用提供實驗依據。 方法：(1) 利用PCR方法構建融合基因mIL-12（p40-p35）-6B11ScFv(VH-VL) 真核表達載體pSecTaq2B和pSBI。 (2) pSecTaq2B轉染CHO，篩選陽性克隆，擴大培養，誘導表達，建立穩定表達細胞株。 (3) pSBI轉染293EBNA細胞，誘導6B11ScFv –mIL-12融合蛋白的瞬時高效表達，親和層析純化表達蛋白。 (4) Elisa和western blot檢測表達蛋白免疫活性。(5) 混合淋巴細胞增殖實驗，淋巴細胞表型分析，腫瘤細胞殺傷實驗檢測融合蛋白體外生物學活性。 (6) C57BL/6J小鼠卵巢癌皮下荷瘤模型體內免疫，觀察融合蛋白體內抗卵巢癌的功能。結果： (1) 成功構建了真核表達載體pSecTag2B/6B11ScFv-mIL-12和pSBI/6B11ScFv -mIL-12。 (2) 建立了6B11ScFv –mIL-12穩定表達的CHO細胞株。(3) 實現了6B11ScFv –mIL-12在293EBNA細胞的瞬時高效表達。 (4) 體外免疫學活性實驗表明6B11ScFv –mIL-12具有6B11ScFv和mIL-12的雙重免疫活性，能夠特異結合卵巢癌單克隆抗體COC166-9及兔抗小鼠IL-12抗體。 (5) 體外生物學活性實驗表明，6B11ScFv –mIL-12能夠刺激PHA活化的淋巴細胞增殖；增加NK細胞比例，誘導LAK活化；誘導IFN-r生成增加；活化的淋巴細胞 對CA166-9陽性的腫瘤細胞具有特異的殺傷作用。 (6) 體內功能研究表明，6B11ScFv–mIL-12融合蛋白能夠抑制C57BL/6J小鼠卵巢癌ID8皮下瘤的生長。結論： 6B11ScFv-mIL-12融合蛋白具有6B11和mIL-12雙重免活性，有可能作為抗獨特型疫苗用於卵巢癌的主動免疫。
項目摘要
抗獨特型抗體腫瘤疫苗，在國外已進入II、III期臨床試驗。在國內，我中心率先製備出自主智慧財產權的抗獨特型單抗6B11，研究表明其能夠模擬卵巢癌抗原，誘導機體產生特異性抗卵巢癌細胞免疫和體液免疫。.IL-12是目前發現的對體內免疫細胞作用最強、最廣的細胞因子，主要作用於T和NK，促進CTL和LAK活性，提高IFN-γ和IL-2生成，有明顯的抗腫瘤作用，與IL-2和IFN-γ相比，抗瘤效應更強，而且毒副作用低。.本課題採用基因工程技術成功將6B11ScFv與鼠IL-12融合，實現了融合蛋白的真核表達並將繼續深入研究融合蛋白的體內外功能。預期融合蛋白中6B11發揮特異性抗卵巢癌作用，而IL-12一方面充當佐劑增強6B11的穩定性和免疫原性，另一方面作為協同分子，激活NK細胞、促進IFN-γ和TNF-α分泌，發揮獨立的抗腫瘤作用。.本研究將為IL-12-6B11ScFv的進一步套用提供實驗依據。
