隨著國內市場和進出口貿易對食品安全的重視，食品的微生物檢測技術也面臨著更大的壓力。傳統檢測方法非常繁瑣，需要耗費大量的人力物力，而且檢測周期長、靈敏度相對較低，難以滿足目前國內外對食品安全檢測的要求。為此，人們相繼提出了一系列簡便、快捷、敏感、準確的檢測新思路，快速測試片法是近年來不斷取得進展的一種新型的檢測方法。快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附養在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品微生物的方法 .1995年，德國學者FJ.Forg發明了一種簡單快速的大腸菌群快速檢測法一紙片法，使原來的檢測周期由72h縮短到15h，材料成本降低了3/1，同時大大簡化了操作程式。
基本介紹
- 中文名：快速測試片法
- 外文名：Quick test piece method
- 拼音：kuaisuceshipianfa
- 培養基載體：紙片、紙膜、膠片
- 優點：簡便、快捷、敏感、準確
- 目的：測定微生物
方法,優點,缺點,
方法
測試片為預先製備好的培養基系統和一種冷水可溶性的凝膠劑，以及由於檢測項目不同而不同的指示劑。它由上下兩層薄膜組成，下層的聚乙烯薄膜上印有格線並且覆蓋有細菌生長的培養基，上層是聚丙烯薄膜。使用時只需接種一毫升待測樣品的稀釋液在下層的培養基上，蓋上上層聚丙烯薄膜，此時聚乙烯層上的培養基由於水的作用生成水合物，適合細菌的生長。我們在實驗中用得最多的是3M Petrifilm檢測片。
菌落總數測試片篩選白色、無毒、中速、密度均勻、吸附力合格的濾紙，將濾紙裁剪成合適的尺寸，通常1.0cm X 5.0cm大小。將滅菌的TTC加大到無菌的培養基後，將無菌濾紙浸入其中，根據需要控制濾紙的培養基吸附量，以適宜的溫度乾燥，分裝於己滅菌的聚丙烯塑膠口袋內，密封備用。使用時把1mL待測液加於紙片上，壓平後置於37 ℃培養箱培養16~18h，即可計數。檢測紙片為一次性使用，使用後焚燒處理即可。通過實驗對快速測試片法和國標方法進行對比，結果顯示兩種方法在統計學上無顯著性差異，但由於濾紙具有較大的間隙，菌體長在纖維之間而使肉眼無法判斷，所以一般比實際菌數要少。
大腸菌群、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌是食品微生物檢測中的常規項目，通常採用的傳統方法需要大量的人力物力和較長的培養時間，而採用Petrifilm大腸菌群和大腸桿菌計數紙片（PEC）和Petrifilm金黃色葡萄球菌測試片（STX）只需24~48小時。大腸菌群、大腸桿菌檢測紙片含有改良的VRB（Violet Red Bile）培養基及葡萄糖普酸酶指示劑。絕大多數大腸桿菌能產生R一葡萄糖普酸酶，與培養基中的指示劑反應，產生藍色沉澱環繞在大腸桿菌菌落周圍，表面覆蓋的膠膜，可留住發酵乳糖產生的氣體，形成藍色和深藍色的菌落並有氣泡相連。大腸菌群菌落在測試片上產酸，pH指示劑使培養基變為暗紅色，在紅色菌落周圍有氣泡者為大腸菌群。所以，一次測試即可測出大腸桿菌和大腸菌群數：帶氣泡的藍色和紅色菌落為大腸菌群，帶氣泡的藍色菌落為大腸桿菌。
菌落總數測試片篩選白色、無毒、中速、密度均勻、吸附力合格的濾紙，將濾紙裁剪成合適的尺寸，通常1.0cm X 5.0cm大小。將滅菌的TTC加大到無菌的培養基後，將無菌濾紙浸入其中，根據需要控制濾紙的培養基吸附量，以適宜的溫度乾燥，分裝於己滅菌的聚丙烯塑膠口袋內，密封備用。使用時把1mL待測液加於紙片上，壓平後置於37 ℃培養箱培養16~18h，即可計數。檢測紙片為一次性使用，使用後焚燒處理即可。通過實驗對快速測試片法和國標方法進行對比，結果顯示兩種方法在統計學上無顯著性差異，但由於濾紙具有較大的間隙，菌體長在纖維之間而使肉眼無法判斷，所以一般比實際菌數要少。
大腸菌群、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌是食品微生物檢測中的常規項目，通常採用的傳統方法需要大量的人力物力和較長的培養時間，而採用Petrifilm大腸菌群和大腸桿菌計數紙片（PEC）和Petrifilm金黃色葡萄球菌測試片（STX）只需24~48小時。大腸菌群、大腸桿菌檢測紙片含有改良的VRB（Violet Red Bile）培養基及葡萄糖普酸酶指示劑。絕大多數大腸桿菌能產生R一葡萄糖普酸酶，與培養基中的指示劑反應，產生藍色沉澱環繞在大腸桿菌菌落周圍，表面覆蓋的膠膜，可留住發酵乳糖產生的氣體，形成藍色和深藍色的菌落並有氣泡相連。大腸菌群菌落在測試片上產酸，pH指示劑使培養基變為暗紅色，在紅色菌落周圍有氣泡者為大腸菌群。所以，一次測試即可測出大腸桿菌和大腸菌群數：帶氣泡的藍色和紅色菌落為大腸菌群，帶氣泡的藍色菌落為大腸桿菌。
優點
食品安全問題一直是引起人們廣泛關注的全球性問題之一，長期以來，科學家們都在尋求簡單、快捷、準確的快速檢測方法，從傳統煩瑣費時的瓊脂平板培養法到現代方便、靈敏的各種免疫法、分子生物學及儀器聯用等方法，雖然有些技術方法還存在不完善、不足的地方，通過不同種類樣品的比較試驗得出結論：Petrifilm大腸菌群檢驗方法有很強的選擇性，不會出現假陽性的結果。紙片法的主要優點是：檢出率高，體積較小，操作簡便，培養時間短，占用空間少，特別適用於實驗空間小的實驗室及野外操作。第一，快速測試片可測定少量檢品，不需要配製試劑，不需要大量的玻璃器皿，操作簡便迅速；易於消毒保存，便於運輸，攜帶方便，價格低廉，加之除紙片外無其他任何廢液廢物，大大減少或消除對環境的污染，以及試驗後的清洗工作，減少了工作量。另外，避免了熱瓊脂法不適宜受損細菌恢復的缺陷，故適用於實驗室、生產現場和野外環境工作使用。第二，快速測試片可以在取樣時同時接種，結果更能反映當時樣本中真實的細菌數，防止延長接種時間時由於細菌繁殖造成的數量增多。第三，常規法一般需要時間較長，而且要特定的溫度，這樣導致許多基層單位和食品企業不能實施，也不能達到及時檢測的目的。而測試片無需進行使用前的準備工作，大大縮短了時間。
缺點
缺點為：用濾紙作載體，濾孔過大，導致濾紙雙面都有菌落生長而無法計數；濾紙保水性差，檢驗培養中又不能保持濕度充分，不利於菌體生長；濾紙檢驗卡存在營養物質分布不均勻的問題，加樣也不能迅速擴散，導致菌體生長分布不均勻；另外，由於顯色指示劑系統單一，不能對細菌有區別地訓一數，真菌會更差，所以很難全而推廣。因此，開發優良的載體和更高效的顯色物質十分重要。各國的專家都在致力於改善或尋求更加科學、更加完善的快速檢測技術，相信隨著科學技術的不斷進步有更多新的技術和方法不斷湧現。不久將來食品微生物檢測技術一定能更好的服務於人類。
