《影響H9N2禽流感病毒氣溶膠傳播效率的分子機制》是依託揚州大學，由王曉泉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：影響H9N2禽流感病毒氣溶膠傳播效率的分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：王曉泉
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
前期篩選到兩株遺傳背景相似、氣溶膠傳播效率差異顯著的H9N2亞型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV），並已進行全基因組測序，但對哺乳動物氣溶膠傳播效率的機制還不清楚。為進一步探索H9N2亞型AIV在哺乳動物氣溶膠傳播效率差異的分子機制，本項目擬採用反向遺傳技術構建兩個毒株的8基因轉錄/表達質粒，兩個毒株之間單個基因或基因組合如HA+NA進行相互替換，拯救重組病毒，通過細胞感染試驗和豚鼠動物模型來進行生物學特性分析，根據其對細胞的致病性、豚鼠體內分布情況、組織滴度和病毒載量等水平的不同，確定影響H9N2 AIV在豚鼠氣溶膠傳播效率的主要基因。根據基因組生物信息學分析結果對該基因上差異功能位點進行定點突變，比較突變株生物學特性，最終確定影響H9N2 AIV 在豚鼠氣溶膠傳播效率的某個胺基酸或核苷酸位點。
結題摘要
低致病性H9N2禽流感病毒在集約化養殖場中發病率高、傳播速度快、對養禽業造成巨大經濟損失。其中氣溶膠傳播是流感病毒感染宿主的一個重要間接接觸途徑，與直接接觸導致的感染相比，它在一個群體中的波及面更廣、傳播速度更快。因此，了解氣溶膠傳播的相關分子機制對於防控H9N2禽流感疫情具有重要意義。 本項目任務目標是：研究影響H9N2禽流感病毒氣溶膠傳播的分子機制，確定決定H9N2禽流感病毒氣溶膠傳播的關鍵基因和關鍵位點，該任務已經完成。在此基礎上還初步探索了PA-X蛋白（流感病毒PA基因移碼產生的一種蛋白）對於H9N2病毒傳播能力和致病性的影響。結果如下： 1、氣溶膠遺傳背景相近而傳播能力不同的H9N2亞型禽流感病毒的篩選 從1998-2011年獲得的禽流感病毒分離株中篩選出遺傳背景相近但氣溶膠傳播能力差異的H9N2病毒：具有氣溶膠傳播特性的A/chicken/Shanghai/7/2000 (SH7)株和不具有氣溶膠傳播特性的A/chicken/Shanghai/14/2000 (SH14)株。 2、確定H9N2亞型禽流感病毒氣溶膠傳播相關的病毒基因和關鍵胺基酸位點及其作用機制 以SH7和SH14為研究對象，通過反向遺傳技術，將單個基因或兩個以上基因組合在兩個毒株之間進行互相替換，結果說明PA和HA基因是影響H9N2禽流感病毒氣溶膠傳播的關鍵基因，NP和NS基因對傳播有輔助作用；通過點突變發現HA的363位胺基酸和PA的672位胺基酸是影響病毒氣溶膠傳播能力的關鍵位點，這些關鍵位點對排毒水平、病毒聚合酶活性、酸穩定性、熱穩定性產生影響，綜合分析了H9N2亞型禽流感病毒的氣溶膠傳播能力的分子機制。 3、PA-X蛋白對H9N2禽流感病毒傳播能力的影響 初步探索了PA-X蛋白對於H9N2病毒傳播能力和致病性的影響，SH7相較於7PAXD病毒(SH7的PA-X蛋白缺失株)而言能夠誘導更為強烈的炎症反應，炎性細胞因子均不同程度上調錶達，這雖然與已經發表的H1N1流感病毒中PA-X蛋白能夠降低病毒致病性的結果有所差異，但是H9N2禽流感病毒對哺乳動物和禽類都是低致病性病毒，因此推測PA-X蛋白作為流感病毒的非必須蛋白是協助病毒更好適應環境的輔助蛋白。該數據首次提供了H9N2禽流感病毒PA-X蛋白的生物學作用數據，推進了人們對於PA-X蛋白在流感病毒中功能的認識。
