引物二聚體

引物二聚體是引物的3'端間相互錯配擴增形成的。引物二聚體的出現是必然的，只是或多或少的問題，電泳時看不到引物二聚體帶也不代表沒有二聚體出現，只是含量低我們 的肉眼看不到而已。提高PCR嚴謹性(包括提高退火溫度，降低引物濃度等)可大大降低二聚體的濃度。

基本介紹

• 中文名：引物二聚體
• 外文名：primer dimer

方法：

1從引物自身 著手，重新設計引物，這是最根本解決這一問題的辦法;

2.可能模板有問題;模板濃度過小，適當加大模板量;

3.Taq酶，引物，Mg2+濃度可能過高，可 降低它們的濃度;

4.取你所要加的上下游引物混合後，在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘，然後迅速拿出至於冰塊之上瞬時冷卻，這時再加入反應體系當中，引 物二聚體就會消失的;理由:引物可能會發生髮夾結構,自身環化等結構,在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘可使引物變為單鏈，以減少二聚體。不過有人認為在 PCR儀上95度變性5min也同樣達到目的，而且成功試過通過延長退火時間也可以消除引物二聚體。

5.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可 以增強特異性;

6.PCR反應體系的配製在冰上進行，最後加TAq酶，PCR結束後，產物勿放置在室溫下過長時間，有人認為室溫下有些TAQ酶會將多餘的 引物合成為二聚體。
7.減少循環數;
8.降低退火溫度後有條帶，則應逐漸提高溫度，若提高溫度的同時產物量減少，則考慮增加鎂離子濃度(根據擴增片斷長度 而定，片段長則相應鎂離子濃度應該高一些);
9.若提高退火溫度，發現還是只有引物二聚體，而且鎂離子的濃度在20-25mmol/l沒有區別，則考慮 Buffer等試劑沒有完全融解、混勻，導致吸取的試劑濃度不對。
10.以上次的pcr產物作模板二次pcr，可以提高引物與模板的特異性，減少引物二聚 體，如果兩次時間間隔短的話，可以把原產物稀釋100-1000倍，如果間隔較長可以稀釋50-100倍;