《幹細胞衰老程式調控骨髓瘤亞型演變》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由陳協群擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：幹細胞衰老程式調控骨髓瘤亞型演變
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳協群
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
採用免疫磁珠法分離、純化不同臨床亞型骨髓中的骨髓瘤幹細胞與原代細胞，對比分析衰老細胞（β-Gal+）與增殖細胞（Ki-67+,BrdU+）比例以及衰老相關基因（P16、P14、CDK2、Skp2、P21、P27及Pten等）表達水平（蛋白與mRNA）,並研究其與骨髓瘤亞型演變的相關性；採用慢病毒介導的基因轉染，對比分析P16、P14等基因表達水平改變對骨髓瘤幹細胞與細胞株的增殖活性、細胞周期時相、體外克隆形成、NOD/SCID鼠體內成瘤能力以及自我更新相關基因(Bmil與Hes1)表達的影響。項目主要意義：①從克隆源細胞或幹細胞角度探討衰老程式在骨髓瘤亞型維持與演變中的作用，更有利於從生物學層面認識、理解骨髓瘤的惡變與進展機制； ②探討若干細胞衰老效應蛋白表達與骨髓瘤各亞型的相關性，有可能獲得一組能及時、準確預測骨髓瘤亞型演變的全新的生物學標誌。
結題摘要
自噬影響多發性骨髓瘤（MM）細胞耐藥性。研究自噬表遺傳調控及其與MM細胞死亡程式之關係，對於探討MM細胞內在抗損傷機制具有重要價值。項目主要研究內容：（1）組蛋白修飾（甲基化和/或乙醯化）調控MM細胞自噬程式之機制；（2）組蛋白修飾和自噬程式紊亂對MM細胞死亡程式之影響；（3）組蛋白乙醯化、DNA損傷反應（DDR）及MM凋亡之間內在聯繫。項目重要結果與關鍵數據：（1）化學抑制EZH2（H3K27特異性甲基轉移酶）誘導MM細胞自噬小體形成並上調自噬相關基因（LC3，p62，Beclin1）表達；（2）化學或RNAi手段阻斷自噬能顯著增加EZH2抑制細胞的S期（BrdU 摻入）比例與存活率；（3）ChIP-qPCR證實，LC3、p62及Beclin1基因啟動子區H3K27me3富集降低可能為EZH2受抑靶細胞自噬活化之重要機制；（4）抑制EZH2活化靶細胞自噬伴有組蛋白乙醯轉移酶MOF及其催化產物H4K16ac水平下調，採用化學小分子VPA（丙戊酸鈉）或EX527靶向抑制組蛋白脫乙醯酶（HDAC）SIRT1能抑制靶細胞自噬並顯著上調H4K16ac水平，致使靶細胞死亡反應（壞死與凋亡）顯著放大；（5）EZH2受抑細胞中LC3、p62及Beclin1基因啟動子區相同DNA序列上H3K27me3富集降低與H4K16ac富集增加並存，強烈提示H3K27me3與H4K16ac的協同在EZH2抑制劑活化的細胞自噬過程中的重要作用；（6）丙戊酸鈉和廣譜HDAC抑制劑西達本胺（chidamide，抗T細胞淋巴瘤藥物）均能有效抑制MM細胞自噬並顯著放大DNA損傷抗腫瘤藥物的促凋亡活性。結論與科學意義：（1）靶向EZH2通過H3K27me3與H4K16ac的協同作用有效誘導細胞毒性自噬；（2）聯合抑制SIRT1與EZH2能顯著放大自噬相關的細胞死亡反應；（3）表遺傳通路靶向藥物具有克服MM臨床耐藥或難治性的潛在套用價值。
