幹細胞因子及c-Kit受體系統誘導胰腺癌神經浸潤的研究

項目摘要

幹細胞因子(SCF)與受體c-kit結合後可促進多種腫瘤進展，而其對胰腺癌神經浸潤的作用尚不明了。前期研究表明：SCF可在常氧態和缺氧態下均可上調胰腺癌細胞HIF-1α表達，進一步激活HIF-1α下游多個與神經生長相關靶基因表達，從而增強胰腺癌細胞嗜神經性；在缺氧態下，神經纖維出現消失和/或脫髓鞘現象，最終形成破損，有利於胰腺癌神經浸潤的發生。本研究以胰腺癌神經浸潤為出發點，以SCF和HIF-1α為著眼點，在建立體外癌細胞－神經三維立體共培養以及體內裸鼠荷瘤模型的基礎上，運用RT-PCR、Western Blot、RNAi、免疫組化、Transwell、透射電鏡等技術，從組織細胞學、分子生物學水平探討SCF對胰腺癌神經浸潤的影響，驗證SCF通過HIF-1α促進胰腺癌神經浸潤的假說，分析其中的調控機制，為胰腺癌神經浸潤理論提供新思路，為未來臨床治療提供新靶點。

結題摘要

胰腺癌是一種病死率極高的消化系統腫瘤，神經浸潤是胰腺癌的常見現象，是局部復發和疼痛的重要原因。幹細胞因子(SCF)是一種重要的造血因子，與c-Kit受體結合後在一些實體腫瘤和造血系統腫瘤的增殖、侵襲中起到了重要的作用。缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)常在缺氧態下因代謝減少而產生蓄積，是腫瘤演變的中樞環節之一。胰腺癌是一種實體腫瘤，腫瘤內部常常存在缺氧的情況，而SCF/c-kit系統和HIF-1α對胰腺癌神經浸潤的作用尚不明了。據此，本研究以胰腺癌神經浸潤為出發點，以SCF和HIF-1α為著眼點，在建立體外癌細胞－神經三維立體共培養以及體內裸鼠荷瘤模型的基礎上，運用RT-PCR、Western Blot、RNAi、免疫組化、Transwell、透射電鏡等技術，探討SCF對胰腺癌神經浸潤的影響，驗證SCF通過HIF-1α促進胰腺癌神經浸潤的假說，分析其中的調控機制。結果顯示：(1)SCF在胰腺癌組織中無表達，而c-Kit受體、HIF-1α與神經浸潤具有顯著正相關性；(2) SCF及缺氧可使HIF-1α蛋白表達上調，但對其mRNA轉錄水平無顯著影響；(3)SCF可以促進胰腺癌細胞侵襲，上調MMP2、MMP9、NGF基因表達，並且這種效應是HIF-1α依賴性的；si-HIF-1α和c-Kit受體阻滯劑可以有效阻滯這種上調效應；(4)共培養實驗中，在SCF作用下，癌細胞呈簇狀向DRG生長，並與神經突起發生互動作用；(5)在胰腺癌裸鼠坐骨神經浸潤模型中，SCF組裸鼠神經麻痹出現率高於對照組；SCF組腫瘤體積較對照組增大；HE染色和免疫組化顯示，腫瘤的生長並非單純的壓迫性生長，而是侵入神經內進行生長；電鏡發現，各組癌細胞超微結構完整，SCF組中神經纖維髓鞘溶解而突起仍然保存，而對照組中髓鞘溶解較弱；(6)在體內實驗中，SCF/c-Kit系統可上調MMP2、MMP9、NGF基因表達，並且這種效應是HIF-1α依賴性的，提示HIF-1α在SCF/c-Kit系統介導的胰腺癌神經浸潤發生中起核心作用。 SCF/c-Kit系統誘導胰腺癌神經浸潤是通過外源性的SCF與胰腺癌c-Kit受體結合後，以非氧張力依賴性上調HIF-1α表達，並以HIF-1α為核心上調下游與腫瘤侵襲相關的靶基因以及與神經粘附侵襲相關的靶基因的表達，增強胰腺癌侵襲力及神經粘附浸潤能力，從而促進胰腺癌細胞神經浸潤的發生

幹細胞因子及c-Kit受體系統誘導胰腺癌神經浸潤的研究

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