《小激活RNA上調抑癌基因VEZT在胃癌的作用及其分子機制》是依託山東大學，由李樂平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：小激活RNA上調抑癌基因VEZT在胃癌的作用及其分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李樂平
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
胃癌在消化道惡性腫瘤中位居首位，預後差、死亡率高。VEZT基因是我們前期研究中新發現的胃癌抑癌基因，其在胃癌中低表達與啟動子區甲基化有關，體內外實驗證明：VEZT抑制胃癌生長、侵襲、遷移和腫瘤形成，saRNA能激活VEZT表達。但其激活機制不明確。本研究擬以上述研究為基礎，旨在運用RNAa技術篩選激活VEZT表達的saRNA，通過體外實驗觀察saRNA對胃癌細胞增殖、凋亡、成瘤性等的影響，體內實驗觀察激活VEZT表達後對裸鼠移植瘤的影響，評價其體內抗腫瘤效果。同時，為探討VEZT激活的分子機制，我們運用螢光素酶報告基因、甲基化特異性PCR、亞硫酸鹽測序PCR和CHIP-chip 技術分析saRNA激活胃癌VEZT表達與啟動子區DNA甲基化、組蛋白修飾之間的關係。本研究旨在探討saRNA介導VEZT激活用於胃癌治療的可能性，為進一步研究VEZT作為胃癌治療的新靶點提供理論依據。
結題摘要
胃癌在消化道惡性腫瘤中位居首位，預後差、死亡率高。確定一個能夠有效的特異性上調VEZT表達的saRNA序列，確定saRNA對胃癌細胞生長、增殖、侵襲和遷移的影響。我們合成了三種作用於VEZT基因啟動子不同位置的與轉錄起始位點相關的saRNAs。我們使用dsControl saRNA作為陰性對照；一種特殊的shRNA，用於敲去VEZT，並消除saRNA的任何非靶向效果。sgc-7901和m-28細胞均可與不同的saRNAs進行轉染，或僅用lipofectamine2000單獨處理。為了確定最有效的saRNA，實驗中將使用實時PCR和蛋白質印記法檢測每個組的VEZT基因 mRNA含量和相應蛋白質含量。在篩選後，兩種細胞系都經過選擇的saRNA,dsControl或Lipofectamine2000進行處理。saRNA處理的細胞分為兩組:第一類被套用在實驗中，第二組使用RNAi-mate轉染shRNA。用cck-8試劑檢測轉染了saRNA、saRNA和shRNA以及其他細胞的增殖情況。用transwell小室試驗測定細胞的入侵和遷移能力。我們通過實時PCR和蛋白質印記鑑定出最有效的saRNA。被選擇的saRNA通過特異性的活化VEZT抑制GC細胞的生長、侵襲和遷移。實時PCR和蛋白質印記結果顯示，與對照組相比(P<0.01)，saRNA處理組對VEZT表達有明顯的上調作用，相應胃癌細胞增殖、侵襲和遷移能力明顯下降;此外，對照組之間無明顯差異(P>0.05)。這一現象為saRNA設計和胃癌基因治療提供了理論依據。
