基本介紹
- 中文名：孚爾根染色法
- 發現時間：1924年
- 實驗試劑：席夫試劑
- 結論：鑑定了染色體上DNA的存在
簡介,實驗目的,實驗材料,實驗準備,藥品配製,實驗步驟,
簡介
實驗原理：細胞中的DNA受1mol/L HCl，60℃水解作用以後，核酸中的嘌呤鹼很快完全被除掉，使脫氧核糖中潛在的醛基獲得自由狀態。水解後，組織要經水洗再移至希夫（Schiff）試劑中，希夫試劑即同露出來的醛基發生反應，呈現紫紅色。這個反應是Feulgen在1942年提出來的，是DNA的一個特異性檢查法。
水解的時間很重要，因為核酸的水解有兩個過程，第一，嘌呤鹼很快被除掉，脫氧核糖中潛在的醛基顯露出來，第二，組蛋白和核酸愈來愈多地被除掉。在短時間的水解作用以後，第一個過程占優勢，這時候用希夫試劑染色，染色體的染色作用最強。隨著水解作用的繼續進行，第二個過程逐漸變成優勢，因此水解液中的希夫反應增強，而染色體中的希夫應減弱。最後，第二個過程超過第一過程時，染色體也隨之停止反應。
希夫試劑是鹼性品紅———亞硫酸溶液，呈無色。與DNA醛基反應後，使鹼性品紅恢復原來的紅色。
實驗目的
觀察蠶豆根尖細胞或其它根尖細胞內染色體中的DNA，以及染色體在有絲分裂中的行為，掌握Feulgen染色方法。
實驗材料
上次實驗製成了石蠟切片。
實驗準備
1．用具 立式染色缸一套，鑷子，蓋玻片，小漏斗，鐵架，毛邊紙，玻璃棒，顯微鏡，恆溫水浴鍋，溫度計，燒杯，棕色瓶，黑紙。
2．玻璃器皿的清洗 主要是染色缸的清洗，一般用肥皂粉洗，用水沖淨即可，如不能洗淨時，要用洗液浸泡後，再沖洗，自來水洗後，再用少量蒸餾水過洗一次。盛放100%酒精、二甲苯的染色缸必須乾燥，缸蓋內緣必須塗以幾士林，以防止蒸發和收水分，影響濃度。染色缸上要貼上標籤。
3．實驗所需藥口及配製
濃鹽酸（36—38%），鹼性品紅，偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5）;
亞硫酸鈉（Na2SO3）,固綠（fast green），加拿大中性樹膠乙醇（30—100%），二甲苯。
藥品配製
1各種濃度的乙醇配製.
21NHCI配製：取濃HCI 82.5毫升加蒸餾水至1000毫升，搖勻。
3Sciff 試劑的配製
0．5克鹼性品紅，加到已經煮沸的100毫升蒸餾水中，再煮沸3—4分鐘，待溶液冷卻到50℃時過濾，再等溶液冷到25℃以下時，加入10毫升的1NHCI和1。5克偏重亞硫酸鈉，裝在棕色瓶中，塞緊瓶子，用黑紙包好，放在暗處，第二天觀察，溶液還是淡紅色就不能用，只得重配。
偏重亞硫酸鈉與1NHCI反應，放出SO2，SO2與鹼性品紅反應，生成鹼性品紅--亞硫酸溶液，呈無色。
4漂染液的配製
先配10%的亞硫酸鈉溶液。
把10%亞硫酸鈉溶液10毫升加200毫升蒸餾水，再加10毫升1NHCI，即成漂當液。
5固綠染色液
0.5克固綠溶於100毫升95%乙醇溶液。
實驗步驟
2．水解 先在恆溫水浴箱中準備好恆溫60℃的1NHCI。注意一定要控制好溫度不能過高，高了醛基要破壞，低了水解不充分，醛基不能釋放出來。水解的時間長短要根據材料，以及固定液的種類而定。根據試驗結果，取一個適當時間。
因加拿大樹膠溶於二甲苯，所以片子一定要經二甲苯透明後才進行封片，操作方法如下：
1.用鑷子從二甲苯中取出載玻片，以毛邊紙吸乾余液。
2.左手開啟樹膠瓶，右手用瓶中玻璃棒蘸取樹膠滴於載玻片上，並隨即蓋好瓶蓋。樹膠的用量視蓋玻片大小而定。要使樹膠在蓋玻片下滿布，不發生過多或不足。
3鑷取潔淨蓋玻片，以一邊澆於載玻片上，然後徐徐放下，使樹膠布滿蓋玻片與載玻片之間。產生氣泡的原因是覆蓋太快樹膠用量不足，或樹膠過稠。氣泡侵入後，妨礙鏡檢，且使標本褪色。如有氣泡產生，則可以在靠近氣泡的一邊再滴樹膠一滴，然後輕壓蓋玻片，使氣泡逸出。
片子封片後，放在切片木框上，讓其自然乾燥，即可保存。
