《姐妹染色單體非隨機分配相關動粒基因的篩選和鑑定》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由張豐擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：姐妹染色單體非隨機分配相關動粒基因的篩選和鑑定
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張豐
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
在細胞有絲分裂過程中，中心粒和姐妹染色單體通常被隨機(random)分配給兩個子代細胞，然而，最近研究發現在幹細胞不對稱分裂（一種有絲分裂）過程中中心粒和姐妹染色單體被非隨機(non-random)遺傳給兩個子代細胞。姐妹染色單體正確分離依賴起始於中心粒的紡錘體微管對姐妹染色單體動粒（kinetochore）的正確識別和錨定，因此，我們推測姐妹染色單體非隨機分配可能與它們各自的動粒蛋白組成成分不同有關。最近研究證實酵母姐妹染色單體各自特異的動粒蛋白直接調節其姐妹染色單體的非隨機分配。但是，目前還沒有發現調節人幹細胞姐妹染色單體非隨機分配相關動粒基因，因此，我們擬採用流式細胞儀分選、基因晶片和分子克隆等技術和方法篩選並鑑定人幹細胞中特異調節姐妹染色單體非隨機分配相關動粒基因，為進一步研究姐妹染色單體非隨機分配與幹細胞生物學特性以及癌變關係建立基礎。
結題摘要
幹細胞不對稱分裂過程中，姐妹染色單體發生非隨機分配。為了篩選特異調節姐妹染色單體非隨機分配的動粒基因。我們用Hoechst 33342染料染色肺癌A549細胞系之後，流式細胞儀分離Hoechst 33342染色陰性的腫瘤幹細胞和Hoechst 33342染色陽性的非腫瘤幹細胞。基因晶片篩選發現這兩組細胞的表達2倍差異有關動粒相關的基因有：CENP-C，CENP-H，CENP-O ，KIF18A，CENP-P，CENP-M，CENP-N，CENP-S，NSL1，NDC80和NUP107。qRT-PCR驗證發現除了CENP-C,CENP-M和NDC80差異不明顯外，其餘基因都有明顯差異。將有差異的基因克隆入pMD18T載體，產生與綠色螢光蛋白融合基因。轉染A549細胞後，發現只有CENP-P基因參與姐妹染色單體的非隨機分配。後來，我們又隨機克隆了18個動粒基因於pMD18T載體，轉染於A549細胞系後，沒能發現這些基因參與姐妹染色單體的非隨機分配，這些結果提示參與姐妹染色單體非隨機分配的基因可能並不多。進一步研究需要明確CENP-P是否在其他類型的幹細胞中也參與姐妹染色單體的非隨機分配。另外，我們在115例膠質瘤、62例腎癌和112例膀胱尿路上皮癌標本中分析了5-Hydroxymethylcytosine的修飾水平，發現姐妹染色單體表觀遺傳修飾差異明顯的5-Hydroxymethylcytosine在膠質瘤、腎癌和膀胱尿路上皮癌中明顯降低，並且與膠質瘤的進展和臨床預後相關，但是與腎癌和膀胱尿路上皮癌的進展和預後沒有明顯關係。這些結果提示5-Hydroxymethylcytosine是膠質瘤預後的一個新的標誌分子，5-Hydroxymethylcytosine也可能用於臨床泌尿系統癌症和非癌症疾病的區分。
