《大腸癌發生中甲基化敏感microRNA的研究》是依託上海交通大學，由唐潔婷擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：大腸癌發生中甲基化敏感microRNA的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：唐潔婷
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
非編碼小RNA（包括microRNA）介導的改變屬於表觀遺傳學範疇，近期的研究表明，腫瘤發生中伴隨miRNA譜表達異常，其調節機制可能與甲基化調控相關,且部分miRNA可能靶定甲基化轉移酶。本項目通過高通量晶片篩選、亞硫酸鹽修飾後測序、定量PCR等方法篩選和驗證大腸癌甲基化敏感的miRNA；並利用螢光素酶報告基因檢測試驗和Western blot等手段驗證軟體預測的靶基因。同時，探究miRNAs表觀遺傳學譜成為結直腸癌診斷和預後判斷的分子標誌的可能性。另一方面，通過軟體預測並驗證甲基化敏感miRNA的靶基因，進一步了解甲基化敏感miRNA在靶基因的表觀遺傳性調節中的作用，為發現大腸癌防治的表觀遺傳學新切入點做全新的嘗試，實現基因組學與腫瘤生物學的整合。
結題摘要
DNA甲基化水平異常是腫瘤發生過程中抑癌基因沉默的機制之一。人大腸癌（human colorectal cancer，CRC）發生髮展過程中，一種非編碼微小RNA （microRNAs，miRNAs）的表達譜異常，部分miRNAs可能發揮抑癌基因的作用。在此項研究中，我們探討了啟動子區CpG島高甲基化是否是引起miRNAs表達異常的機制之一，並篩選和鑑定與CRC發生髮展相關的甲基化敏感miRNA。我們用miRNA表達晶片檢測去甲基化製劑5氮脫氧胞苷（5-aza-2'-deoxycitidine，5-aza-dC）處理後大腸癌細胞系miRNAs表達譜的變化情況，以初步篩選候選miRNAs。由甲基化特異性PCR（methylation-specific PCR，MSP）和亞硫酸鹽處理後基因組測序兩種方法檢測候選miRNA在大腸癌細胞和組織中的甲基化狀態；以實時定量PCR （quantitative real-time PCR， qRT-PCR）技術檢測細胞和組織中miRNA表達水平。最後，我們通過螢光素酶報告基因技術、qRT-PCR及western blot方法驗證候選miRNA的靶基因。 經5-aza-dC 處理後，mir-345的表達水平顯著升高。甲基化分析顯示，CRC組織中mir-345 CpG島甲基化水平顯著高於正常人的大腸黏膜組織。與正常非癌組織相比較，51.6% CRC組織低表達mir-345，且表達水平與甲基化水平相關。低表達mir-345的病例淋巴結陽性率較高且病理分化較差。此外，我們驗證了BCL2相關永生基因3（BCL2-associated athanogene 3，BAG3）是mir-345的一個靶基因。BAG3是一個凋亡調節因子，我們首次報導了BAG3的表達水平在CRC組織中顯著升高，並與腫瘤的浸潤深度相關。我們的研究提示，mir-345是CRC的一個新的甲基化敏感miRNA。 CpG島甲基化引起的mir-345表達異常可能通過下調其靶基因參與CRC的發生髮展。
