《基於BBB新理論探討Wnt通路在腦出血後的腦保護機制》是依託鄭州大學，由郭付有擔任項目負責人的聯合基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於BBB新理論探討Wnt通路在腦出血後的腦保護機制
- 項目類別：聯合基金項目
- 項目負責人：郭付有
- 依託單位：鄭州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腦出血是嚴重危害人類健康的腦血管病之一，腦出血後繼發腦水腫及神經元凋亡目前缺乏有效的治療手段。本研究基於最新BBB破壞的基礎是神經血管單元（ NVU）的變化，通過製作穩定大鼠腦出血模型，觀察腦出血後Wnt通路分子包括Wnt-1、β-catenin、GSK-3β的誘導表達及意義；檢測血管源性腦水腫、BBB破壞及相關蛋白如緊密連線閉合蛋白3 （TJPC-3）及Caveolin-1的表達變化，從而判斷NVU的組織結構改變與腦出血後繼發損傷發生的分子機制。然後根據Dkk-1作為負性調節Wnt信號通路的關鍵因子，設計並構建出大鼠Dkk-1的siRNA基因慢病毒載體，經體外鑑定干擾效率後篩選出一個有效的干擾片段，將其注射到大鼠腦室內治療腦出血，探討siDkk-1對腦出血後神經元損害、腦水腫及BBB破壞及相關蛋白表達的影響，闡明腦出血後通過激活Wnt經典通路發揮腦保護，最終為腦出血的治療提供又一新途徑。
結題摘要
腦出血是嚴重危害人類健康的常見腦血管病之一，腦出血後血腦屏障（BBB）的破壞及其引發的繼發腦水腫是造成患者顱內壓增高乃至死亡的重要因素，目前缺乏有效的治療手段。本研究通過製作大鼠穩定腦出血模型，觀察大鼠腦出血後血腫周圍腦組織及血漿內Dkk-1的變化，檢測Wnt通路分子包括Wnt-1、β-catenin、GSK-3β的在腦出血後的誘導表達；同時檢測血管源性腦水腫、BBB破壞及相關蛋白如緊密連線閉合蛋白3 （TJPC-3）的表達變化，從而探討腦出血後繼發損傷發生的分子機制。然後根據Dkk-1作為負性調節Wnt信號通路的關鍵因子，設計並構建出大鼠Dkk-1的siRNA基因慢病毒載體，經體外鑑定干擾效率後篩選出一個有效的干擾片段，實驗用量為2×107個傳導單元，將其注射到大鼠腦室內治療腦出血。結果顯示腦出血後血腫周圍腦組織及血漿內Dkk-1在24h和72h較對照組顯著升高，Wnt-1基因表達水平較sham組顯著降低(p＜0.001 )，GSK-3βmＲNA 水平均顯著升高（p＜0.05），而經siDkk-1干預後Wnt-1和GSK-3βmＲNA水平均顯著逆轉，大鼠腦出血24h和72hβ-連環蛋白（β-catenin）表達較sham組顯著升高，經siDkk-1干預後24h和72h，β-catenin的表達水平較假干預組顯著升高(p< 0.05). 大鼠腦出血24h和72h術側基底節區腦組織含水量及EB含量均顯著增加（p＜0.01），腦組織緊密連線閉合蛋白3 （TJPC-3）的表達下降，而經siDkk-1干預後較ICH+vehicle組腦含水量及EB含量均顯著下降（p＜0.01），同時伴透射電鏡（TEM）示BBB組織結構改善及行為學評分的提高。研究結果表明：腦出血可誘導Dkk-1的過度表達，通過RNA干擾Dkk-1進而激活Wnt經典通路發揮腦出血後的腦保護作用，為腦出血的臨床治療提供又一新途徑。
