《基於雜交鏈反應的單分子檢測和高通量篩選》是依託山東大學，由王磊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於雜交鏈反應的單分子檢測和高通量篩選
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王磊
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
本研究主要目的是建立一種雜交鏈反應（HCR）指數擴增方法。這方面國內外研究很少，且集中在HCR線性擴增，未有系統深入的報導。本項目具體目標如下：首先以DNA分子為研究對象，通過DNA納米結構設計，利用DNA分子卓越的自組裝和識別能力實現精確的從底向上的納米構築，實現恆溫無酶的指數鏈式反應，以AFM和落射螢光顯微術為技術平台，選擇螢光染料或量子點作為螢光標記物，通過核酸雜交、適-配體結合、抗原-抗體結合等多種識別方式觸發HCR，進行信號的指數擴增，將該方法擴展套用於蛋白質（抗原等）、DNA等生物分子的單分子計數檢測，從而達到對廣泛分析物的高選擇性、高靈敏性檢測。進一步可以對分析物進行螢光波長-螢光強度的編碼，為高通量篩選提供平台。
結題摘要
目前，生物樣品中蛋白質、生物小分子等測定方法的研究主要集中在如何增加檢測方法的靈敏度和提高檢測的特異性上。因此，構建高靈敏、高特異性的分析方法對生物樣本中蛋白質等的檢測具有重要的臨床意義。本工作利用HCR信號擴增方法結合單分子檢測技術構建了一系列新的、靈敏的蛋白質、生物小分子等定量檢測方法。通過核酸雜交、適-配體結合、抗原-抗體結合等多種識別方式觸發 HCR，進行信號的擴增，將該方法擴展套用於蛋白質（抗原等）、RNA 、腺苷等生物分子的檢測，從而達到對廣泛分析物的高選擇性、高靈敏性定量。包括基於HCR擴增和單分子計數的方法；基於DNA瓦納米支架、HCR擴增和單分子計數的方法；指數擴增的放大方法；基於HCR自組裝螢光編碼的建立。首次將條碼策略和單分子計數相結合用於蛋白質的檢測，且能夠實現複雜樣本中兩種目標物的同時定量，通過擴大目標物種類和設計相應的識別抗體或適體、H1/H2和螢光探針，亦能實現生物分子的高通量篩選。為早期臨床診斷等方面的研究提供了新的方法。本研究的結果，對醫學研究等方面有重要的理論和實際意義。上述研究工作已發表SCI收錄論文10篇，其中影響因子大於5.0的論文8篇。
