《基於適配子的新型海產品貝毒素無毒同步檢測技術研究》是依託吉林大學，由盧士英擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於適配子的新型海產品貝毒素無毒同步檢測技術研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：盧士英
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
全球氣溫變暖，海洋貝毒素引發的海產品食物中毒及公共安全事件不斷增多，貝毒檢測已成為海產食品衛生必檢項目之一。目前採用鼠生物法、HPLC/MS聯用法及免疫學方法中，均大量使用毒素標準品，檢測成本高，對健康及環境不利。本項目依據獨特型抗體Ab2β具有抗原內影像關係，可替代抗原；核酸適配子可與靶物質特異性結合理論，擬以獲得的大田軟海綿酸（OA）、石房蛤毒素（STX）、短裸甲藻毒素（BTX）單抗為靶標，利用SELEX技術從隨機ssDNA文庫中篩選具有Ab2β功能的適配子，並連線獲得串聯適配子。以單抗作為捕獲分子，以適配子作為檢測分子，利用生物素與酶標親和素系統，探索建立3種貝毒的無毒檢測及同步檢測技術，解決使用毒素標準品帶來的不利影響。為建立無毒、實用的貝毒檢測技術提供實驗基礎，並為開發利用適配子建立貝毒感測器等先進技術開僻新的思路，對食品和環境中其他污染物無毒檢測也具有一定的推廣意義和參考價值。
結題摘要
全球氣候變暖，水體富營養化及過度的海產養殖導致赤潮與藻（水）華的頻發，海洋貝毒素引發的海產品食物中毒及公共安全事件不斷增多，嚴重威脅到人們的身體健康和對海產品的開發利用，已成為公共衛生領域和進出口檢驗檢疫工作中一項值得關注的重大問題。目前採用的鼠生物法、HPLC/MS聯用法及免疫學方法中，均大量使用毒素標準品，檢測成本高，對健康及環境不利。解決這一問題的關鍵就是在方法中避免使用或少使用毒素標準品，開發無毒檢測技術。本項目依據核酸適配子可以與靶物質特異性結合而替代抗體；獨特型抗體Ab2β具有抗原內影像關係，可替代抗原的理論，體外合成隨機ssDNA文庫，分別以大田軟海綿酸（OA）、石房蛤毒素（STX）、短裸甲藻毒素（BTX）及它們的單抗分別作為靶標，利用指數富集配體的系統進化（SELEX）技術篩選毒素適配子及具有抗原內影像功能的適配子，探索無毒檢測的新模式。以毒素與蛋白質的偶聯物作為毒素適配子篩選的靶標；以抗體F(ab′)2片段和完整抗體作為毒素內影像適配子篩選的靶標。先後設計兩個文庫，利用微孔板及磁珠SELEX，對3種毒素6個靶標，通過多輪篩選，大量的克隆擴增，序列測定分析與結構預測，獲得針對各自靶物質的核酸序列，對獲得的序列採用直接ELOSA和間接競爭ELOSA方法測定其結合與競爭活性，獲得優勢適配子。利用毒素抗體做固相抗原，捕獲毒素，再加入內影像適配子，利用生物素-親和素-辣根過氧化物酶顯色系統，建立抗體與適配子混合無毒檢測方法；將氨基化的毒素內影像適配子與固相磁珠共價結合，加入預先孵育的單抗與待檢樣品，通過磁性分離、底物顯色建立基於內影像適配子的磁珠檢測方法；利用生物素標記的毒素適配子與固定的互補探針雜交，通過毒素與其適配子結合誘導毒素適配子與固定探針變構解離，通過顯色建立基於毒素適配子的微孔板和磁珠無毒檢測模式；以偶聯蛋白作為固相抗原，以毒素適配子作為檢測探針，實現基於適配子的檢測方法。上述檢測方法的優點是不使用或少使用毒素標準品，實現節約檢測成本，安全無毒的目的；有關核酸適配子在海洋貝毒素檢測中的套用，抗原內影像核酸適配子替代抗獨特型抗體用於檢測分析，可為建立一種更加方便、無毒、實用的貝毒無毒檢測方法提供實驗基礎，並為開發利用適配子建立貝毒感測器等先進技術開闢新的思路，對食品和環境中有毒有害污染物快速無毒檢測方法的研究也具有廣泛的推廣意義。
