《基於液相色譜-飛行時間質譜構建活性多糖糖譜識別體系》是依託南昌大學，由王遠興擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於液相色譜-飛行時間質譜構建活性多糖糖譜識別體系
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：王遠興
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
多糖是一類重要的生物信息大分子，現已證明許多藥用真菌和植物多糖具有廣泛的生物活性，糖類藥物及多糖類保健食品的開發也正日新月異，但與此相關的產品質量控制體系卻還不成熟，相關報導也還鮮見。本研究擬通過HPLC-ELSD檢測篩選具有特徵回響的糖水解酶，在此基礎上採用液相色譜-飛行時間質譜聯用（LC/Q-TOF）技術建立活性多糖酶降解產物結構特徵研究的新方法，構建9種植物或真菌活性多糖的特徵糖譜，並結合化學計量學方法研究不同品系和產地的活性多糖降解產物的指紋特性，最終構建具有特徵識別功能的糖譜體系。本研究將食品分析與食品質量安全相結合，為活性多糖的質量控制研究提供了新的思路和方法，也將對我國食物資源的有效開發產生積極的影響，對糖類藥物和多糖類保健食品的市場監管具有非常重要的現實意義。
結題摘要
多糖是一類重要的生物信息大分子，廣泛存在於藥用真菌和植物中，是藥用真菌和植物發揮其獨特功效的重要活性物質，也是其質量控制的標誌物。隨著多糖藥物及保健品的開發，建立真菌和植物多糖完善可靠的質量控制體系愈顯重要。本項課題在多糖原料的產地和等級鑑定中引入指紋圖譜概念，運用UPLC-ESI-QTOF-MS結合化學計量學方法對多糖部分酸降解產物的指紋性進行研究，實現多糖原料道地性鑑定的目的。本項課題主要從以下四個方面展開： 1、採用水提醇沉法對人參、黑靈芝、鐵皮石斛、冬蟲夏草等真菌和植物活性多糖樣本進行提取，回響面法最佳化料液比、超聲時間、水浴溫度等影響因素，確定了安吉白茶多糖最佳提取條件料液比1：40，超聲時間30min，水浴溫度85oC為最佳。苯酚硫酸法測總糖含量，得黑龍江產人參多糖含量較別的產地高為95.61%，廣州產鐵皮石斛多糖含量較雲南產高為95.67%，西藏那曲一級冬蟲夏草糖含量為79.96%。 2、分別採用酸水解、酶水解方法對黑靈芝、鐵皮石斛、青錢柳、安吉白茶等多糖進行降解。通過單因素實驗，考察了酸濃度、溫度、時間對部分酸水解效果的影響，篩選出了多糖最佳部分酸水解條件。選用木聚糖酶、纖維素酶、果膠酶等8種不同內切水解酶對活性多糖進行降解，篩選特徵回響酶。結果僅有白茶多糖能夠被葡聚糖酶、果膠酶及纖維素酶降解，其它多糖並未篩選到特徵水解酶。 3、建立活性多糖酸降解產物的快速UPLC-ESI-QTOF-MS分析方法。樣品多糖經部分酸水解後，在正負離子模式下進行掃描，無需衍生，黑靈芝多糖可檢測到聚合度為25的聚糖，鐵皮石斛可檢測到聚合度為29的聚糖，人參可檢測到聚合度為43的聚糖。通過離子加荷方式及低聚糖糖苷鍵斷裂方式研究結果，可知黑靈芝存在多種形式的連線方式和連線位點，糖苷鍵有1-4，1-6糖苷鍵。 4、採用UPLC-ESI-QTOF-MS分析多糖降解產物，構建不同產地和不同等級樣品的多糖特徵糖譜，結合化學計量學及代謝組學方法對糖譜進行分析，研究多糖降解產物的指紋特性。利用非監督性的PCA方法，能鑑別三個產地黑靈芝多糖，對不同產地、不同等級的鐵皮石斛也能進行區分。進一步利用偏最小二乘投影判別分析法能清晰地觀察到各產地間或各等級間代謝輪廓的差異，包括產地和等級兩個因素同時考慮也可區分開。
