基本介紹
- 中文名：基因導入
- 成功的例子：“超級小鼠的誕生
- 用處：加速動物的生長新的技術途徑
- 未來適用方向：遺傳工程
功能,物理方法,化學方法,生物學方法,
功能
這方面最成功的例子是“超級小鼠的誕生。這些小鼠生長快，74 d時的體重就接近同窩正常小鼠的兩倍。這一成果的意義不僅為遺傳工程和遺傳疾病（如巨人症）的研究提供了模型，而且也為加速經濟動物的生長提供了新的技術途徑。
物理方法
1.1DNA直接注射法
：是目的基因導入的最簡單方法，但注入量有限，能夠接觸到的腫瘤細胞有限，故獲得的腫瘤細胞轉化率很低，多通過腫瘤局部多點注射給藥。
1.2顆粒轟擊技術
將目的基因包被金屬以後，利用高壓發射裝置，加速包裹目的基因的金屬顆粒進入細胞，從而提高腫瘤細胞的轉化率。
化學方法
2.1脂質體載體
脂質體載體方法具有安全、簡單、低毒、無免疫原性等優點，適用於注射方法進行器官靶向性轉移並有一定的轉移效率。是除病毒載體轉移方法之外的另一種有價值的體內基因轉移方法。多用於體外轉化細胞，或通過瘤組織內注射進行體內轉化，並已有少數臨床套用的報告。常用的是陽離子脂質體（商品名為Lipofectin）。它可自發的與DNA形成複合物，保護外源DNA不被核酸酶降解，具有製備簡單、安全無毒、無免疫原性、重複性、對基因片段大小無限制且轉染操作方便等優點。由於它可與細胞膜直接融合而能有效地避免溶酶體破壞，故遠比傳統的脂質體效率高。缺點是靶向性有限。Nishikawa等從BALB/c小鼠的尾靜脈注射以螢光素酶基因為報告基因的質粒DNA-脂質體複合物， 發現肺、肝、脾等器官組織中都有螢光素酶基因及其產物，持續表達超過3個月。常規脂質體易被網狀內皮系統（RES）細胞攝取，在巨噬細胞本身可成為靶細胞的部位，RES的這種親合性是有利的。Hasegawa等採用日本血凝病毒（ hemagglutinating virus of Japan,HVJ）脂質體為載體，用HSV-tk/Gcv系統治療肝癌發現，在體外試驗中當Gcv的濃度100microg/ml時幾乎所有腫瘤均被殺死，甚至當轉導率只有20%時，也有1/3腫瘤被消滅。此方法重複套用效果更佳，且皮下注射未見明顯的炎症反應。
2.2受體介導法
生物學方法
主要通過構建病毒載體來完成。
3.1逆轉錄病毒（retrovirus，Rv）
構建簡單，裝載外源基因容量最大達8kb，整合入宿主細胞基因組而無病毒蛋白表達。但僅能感染分裂期細胞，體外製備滴度較低，且其隨機整合有引起“插入性突變”的可能。
3.2腺病毒（adenovirus,Adv）
為近年肝細胞肝癌基因治療中報告最多的一種病毒載體。體外製備滴度較大 ，裝載外源基因容量最大達35kb，不整合入宿主細胞基因組因而避免插入突變的危險，能感染分裂細胞和非分裂細胞。但易引起宿主免疫反應而使轉染效率下降，且大劑量靜脈給予可導致嚴重的肝臟炎症反應，因此通過全身給藥受到限制。Nagao等發現瘤內注射重組Adv後，目的基因可有效表達，但表達時間短暫，重複注射後表達效率降低且誘發體液和細胞免疫反應。
3.3單純皰疹病毒
單純皰疹病毒（herps simplex virus，HSV）對非分裂細胞有天然的親合力，裝載外源基因容量達30kb，體外製備滴度接近腺病毒。但構建時難以除去與裂解細胞有關的基因而對細胞毒性大。
3.4腺相關病毒
腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）在人類不引起任何病理性後果，它能感染非分裂S相細胞，還能將基因轉人非周期（noncyling）腫瘤細胞。AAV是一種缺陷前病毒，對人類無致病性。能用於運載外源性重組基因組，已套用於肝和肝癌細胞的治療基因轉移。
3.5其他病毒
痘苗病毒（vaccini virus）可以獨立在細胞之中複製和轉錄，並能以較強的方式表達多個腫瘤抗原。
桿狀病毒（bacul virus）能夠感染肝細胞和肝腫瘤細胞，並能增強肝細胞腫瘤壞死因子a(TNFa)、IL-1a、IL-lβ的表達。
