《基因修飾的內皮祖細胞靶向治療HER-2陽性腫瘤的實驗研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由趙澎濤擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：基因修飾的內皮祖細胞靶向治療HER-2陽性腫瘤的實驗研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：趙澎濤
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
內皮祖細胞(EPC)是血管內皮細胞的前體細胞，參與腫瘤血管形成。由於骨髓來源的EPC具有定向歸巢到腫瘤生長部位的特點，因此被視為一種理想的腫瘤基因靶向治療載體。申請者在前期研究中以小鼠成纖維細胞NIH3T3為細胞載體，通過基因修飾，使其合成分泌型促凋亡融合蛋白，靶向誘導HER-2陽性腫瘤細胞凋亡，取得顯著的治療效果。為進一步增強治療的靶向性，提高殺傷效率，本課題擬構建以重組自殺基因和凋亡誘導基因修飾的EPC為核心的腫瘤雙靶向治療模式：分離培養骨髓來源的EPC，通過基因修飾，使EPC合成並分泌可靶向結合併殺死HER-2陽性腫瘤細胞的融合蛋白(第二靶向)；回輸基因修飾後的EPC到荷瘤動物體內，利用EPC固有的腫瘤趨化性（第一靶向）使其在腫瘤生長部位或轉移灶產生持續殺傷效應。該治療策略對於具有特定膜標記分子的腫瘤具有高度的靶向性，可能為腫瘤的基因治療提供一條高效、持續、低毒的新途徑。
結題摘要
人表皮生長因子受體2（HER-2）是目前公認的腫瘤細胞表面標誌物之一，它是癌基因erbB-2/neu的表達產物， 正常細胞表面幾乎不存在HER-2 ，而腺癌細胞膜往往出現HER-2過表達，如胃癌、卵巢癌和乳腺癌。本研究將重構型caspase-6基因分別與erbB-2單鏈抗體基因（e23sFv）、PE轉膜結構域（PEⅡ）或白喉毒素 （Diphtheria tox in, DT）的Furin識別位點的編碼序列 （FDT）結合，成功構建重組真核表達載體pCMV-e23sFv-PEII-RC6 及pCMV-e23sFv-FDT- RC6，該重組質粒表達的融合蛋白具有以下特點：（1）e23sFv為HER2的單鏈抗體，可以靶向結合HER2表達陽性腫瘤細胞；（2）PEⅡ或FDT結構域使融合蛋白具有內吞體轉位活性，可以有效釋放到靶細胞胞漿中；（3）大小亞基顛倒的重構型caspase-6具有誘導細胞凋亡活性。將pCMV-e23sFv-PEII-RC6 及pCMV-e23sFv-FDT-RC6分別轉染小鼠成纖維細胞NIH3T3，獲得穩定轉染的細胞系PEⅡ-RC6-3T3和FDT-RC6-3T3，體外實驗結果顯示PEⅡ-RC6-3T3和FDT-RC6-3T3可有效合成並分泌融合蛋白e23sFv-PEII-RC6和e23sFv-FDT- RC6，該融合蛋白可靶向進入HER2陽性腫瘤細胞SGC7901，並顯著誘導細胞凋亡，96小時誘導凋亡細胞比例可達70%以上；動物實驗結果顯示，PEⅡ-RC6-3T3和FDT-RC6-3T3接種後可有效抑制裸鼠HER2陽性移植瘤的增長，並顯著延長荷瘤裸鼠的存活時間，免疫組化結果證實，caspase6在瘤體細胞內高表達，大量腫瘤細胞發生凋亡反應。本研究結果充分證明了以細胞作為基因治療載體，移植後治療具有顯著標誌物腫瘤的可行性和有效性，為HER2陽性腫瘤的靶向治療提供了一種新的策略和方法。
