《四氫生物蝶呤對高血壓左室舒張功能的影響及機制》是依託蘭州大學，由余靜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：四氫生物蝶呤對高血壓左室舒張功能的影響及機制
- 依託單位：蘭州大學
- 項目負責人：余靜
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
高血壓致心臟損害早期為左室射血分數正常心力衰竭(HFNEF)，機制不明且療效不佳。前期研究發現HFNEF與一氧化氮合酶(NOS)解偶聯有關，其輔助因子四氫生物蝶呤(BH4)有一定療效。我們假設還原型煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、二氫葉酸還原酶（DHFR）和鳥苷三磷酸環化水解酶-1(GTPCH-1)降低可通過BH4途徑促NOS解偶聯；轉錄後谷胱甘肽氧化修飾可逆轉NOS解偶聯,延緩HFNEF。本研究用高血壓致HFNEF小鼠模型(DOCA鹽敏感小鼠)，兩種劑量BH4干預。組織都卜勒及有創壓力容積法評價左室舒張功能。Western-blot等法測定心肌組織一氧化氮、NOS與NADPH；高效液相色譜等法評價BH4及代謝產物。酶免疫法檢測DHFR和GTPCH-1表達,並測定心肌還原及氧化型谷胱甘肽含量。進一步闡明高血壓致HFNEF機理及外源性BH4通過抑制NOS解偶聯改善心臟舒張功能的機制。
結題摘要
本項目研究四氫生物蝶呤（BH4）對醋酸脫氧皮質酮（DOCA）-鹽型高血壓小鼠左心室舒張功能及蛋白激酶C ε（PKC ε）表達的影響，及其與磷脂醯肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B(PI3K/p-Akt)信號通路的關係。以期為探索左室舒張性心功能不全的治療提供理論依據。研究採用10周齡雄性C57BL/6小鼠隨機分為手術組與對照組。手術組小鼠切除左側腎臟後並在頸部皮下埋入醋酸脫氧皮質酮（DOCA）藥片，術後以普通飼料及1.05% 氯化鈉（NaCl）溶液飼養，至術後14天，隨機分為DOCA組DOCA+BH4組，並分別用生理鹽水（每天每隻0.1mL/10g）和2.5%的BH4溶液（每天每隻0.1mL/10g）灌胃7天。分別進行以下實驗測定：1.鼠尾動脈壓測定小鼠收縮壓（SBP）及舒張壓（DBP）。2.套用彩色都卜勒超聲心動圖二維成像與組織都卜勒成像技術測定各組小鼠結構與心功能參數。3.血流動力學測定。所有亞組均於術後22天時進行取材，所取組織均行以下實驗測定：酶聯免疫吸附實驗測定環磷酸鳥苷（cGMP）、丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)；高效液相色譜法(HPLC)測定心肌組織中BH4及二氫生物蝶呤(BH2)的含量；放免法測定血漿血管緊張素II（Ang II）含量；實時螢光定量聚合酶鏈反應測定心肌組織中α-SA、TGFβ1、Prkce及β-MHC的含量；免疫組化測定VEGF、PLB、PKC-zeta、Serca2、BCL-2、PLB及Bax；Western-blot測定eNOS與PKCε的表達。結果顯示：高血壓時，體內NOS解偶聯、氧化應激水平升高、RAAS系統激活，心肌細胞肥厚增生，肌纖維排列紊亂，心肌順應性下降，這些均可能導致高血壓左室舒張功能不全的發生；左室舒張功能不全可以先於收縮功能不全出現；體內PKC ε表達減少，給予外源性BH4干預後PKC ε表達增加；外源性BH4可以通過PKC ε途徑改善左室舒張功能不全，其具體機制可能與PKC ε能增加NO表達、降低體內氧化應激水平及抑制RAAS活性有關。此外，BH4可以改善高血壓引起的左室舒張功能不全，降低心肌組織的氧化應激，對高血壓患者早期引起的心功能損害具有保護作用。而此作用可能與PI3K/Akt信號有關係，至於BH4通過其他信號通路介導影響心肌組織中NO的水平的表達，而改善心室的舒張功能，尚需要進一步研究證實。
