《嗜熱真菌耐熱β-葡萄糖苷酶的性質及轉糖苷反應機制》是依託中國農業大學，由楊紹青擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：嗜熱真菌耐熱β-葡萄糖苷酶的性質及轉糖苷反應機制
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：楊紹青
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
β-葡萄糖苷酶是一類重要的糖苷水解酶，廣泛套用於食品、飼料、能源、生物轉化等領域。目前國內外研究β-葡萄糖苷酶主要集中在植物和中溫微生物來源上，酶產量低，熱穩定差，難以滿足一些工業上實際套用的需求。迄今，嗜熱真菌耐熱β-葡萄糖苷酶的性質及轉糖苷作用機制研究較少，限制了其套用領域的拓寬與開發。本項目擬以自行選育的嗜熱真菌為出發菌株，採用基因工程的方法克隆和表達不同家族耐熱β-葡萄糖苷酶的基因。在系統考察酶特性的基礎上，進一步採用定向進化技術研究酶的結構與水解及轉糖苷作用之間的關係，結合轉糖苷反應中間產物鑑定分析，探明耐熱β-葡萄糖苷酶的轉糖苷反應機制。另外，繼續從自然界高通量篩選新型高產耐熱β-葡萄糖苷酶的嗜熱真菌。因此，本項目不僅豐富β-葡萄糖苷酶的種類和來源，同時也為β-葡萄糖苷酶的工業化生產及實際套用奠定理論基礎。
結題摘要
自然科學基金青年基金項目“嗜熱真菌耐熱β-葡萄糖苷酶的性質及轉糖苷反應機制”，嚴格按照申請書的研究內容和實施方案執行，經過3年時間的連續、系統研究，目前已經完成課題的研究任務，取得了預期的研究成果。在基金的資助下，共發表SCI收錄論文5篇（申請書預期發表論文4-5篇，其中SCI收錄2-3篇），授權國家發明專利1項（預期申請1-2項）。圍繞申請書的研究內容，我們從自然界選育得到包括嗜熱擬青黴（Paecilomyces thermophila）和米黑根毛霉（Rhizomucor miehei）等10餘株能夠分泌β-葡萄糖苷酶的嗜熱真菌（預期1-2株嗜熱真菌）；從嗜熱真菌嗜熱擬青黴和米黑根毛霉基因組中克隆得到4個不同類型的β-葡萄糖苷酶基因，其中包括1個糖苷水解酶（GH）1家族β-葡萄糖苷酶、2個GH 3家族β-葡萄糖苷酶和一個N-乙醯氨基葡萄糖苷酶，並進行了異源高效表達（預期2-4個葡萄糖苷酶基因）；分別對4個所得的重組葡萄糖苷酶進行分離純化得到純酶（預期2種以上），並研究了所得純酶的酶學特性及其催化作用機制。
