《同源框基因Nkx3.1對前列腺癌Her-2/neu表達調控的研究》是依託浙江大學，由王平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：同源框基因Nkx3.1對前列腺癌Her-2/neu表達調控的研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：王平
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
前列腺癌一旦發展到激素抵抗階段目前無有效處理方法。Nkx3.1是受雄激素調節、前列腺特異的同源框基因。我們前期及國內外研究發現其表達隨前列腺癌進展而下降，且與腫瘤轉移、激素抵抗強烈相關。與之相反，在晚期、轉移、激素抵抗前列腺癌中Her-2/neu呈過表達。通過軟體分析發現，Her-2/neu啟動子區域存在4個潛在的Nkx3.1一致性結合位點。通過構建Nkx3.1真核表達質粒及siRNA載體，使LNCaP細胞Nkx3.1過表達或沉默、恢復DU145和PC3細胞Nkx3.1表達，分析其對Her-2/neu表達影響。染色體免疫共沉澱法進一步分析Nkx3.1對Her-2/neu啟動子調控。以期闡明同源轉錄因子Nkx3.1與Her-2/neu表達、調控的內在聯繫，為臨床防治激素抵抗前列腺癌提供研究基礎。
結題摘要
去勢抵抗性前列腺癌（castrate-resistant prostate cancer ; CRPC）治療是世界性難題，目前尚無理想治療方法。通過對CRPC發生機理進行探究及細胞生物學行為進行修飾的策略對CRPC治療有潛在的臨床意義。在本項研究中我們以CRPC為切入點，通過成熟的分子生物學技術，體外研究與臨床組織樣本相結合系統研究了Nx3.1與Her-2/neu之間調控關係。 我們首先通過分子克隆技術合成Nkx3.1真核表達載體、RNA干擾載體及報告基因載體系列，上述載體通過測序、Nkx3.1體外表達及基因敲除等方式驗證。我們收集前列腺癌臨床樣本，按照Gleason評分分類，採用組織微陣技術、螢光免疫技術分析不同組別Nx3.1及Her-2/neu表達，結果顯示Nkx3.1表達隨前列腺癌進展、惡性程度提高逐漸下降，而Her-2/neu表達逐漸增強。 為了證實Nkx3.1是否為前列腺癌抑制因子，我們分析了Nx3.1表達對前列腺癌細胞活性的影響。LNCaP細胞敲除Nkx3.1基因後，MTT分析細胞增殖，結果顯示Nkx3.1失表達後LNCaP細胞活性明顯增強。Nkx3.1真核表達質粒轉染LNCaP和PC3細胞，使上述細胞Nkx3.1表達或過表達，MTT分析細胞增殖，結果顯示外源性恢復Nkx3.1表達後，前列腺癌細胞活性受到了明顯抑制。 在上述基礎上，我們進一步分析了前列腺癌細胞中Nx3.1表達對Her-2/neu影響。我們首先敲除LNCaP細胞中Nx3.1表達，western blot分析顯示Nx3.1表達抑制後Her-2/neu表達明顯增強。外源性恢復PC3細胞Nkx3.1表達後，Her-2/neu表達下降。上述結果顯示Nkx3.1為前列腺癌抑制因子，Nkx3.1可抑制Her-2/neu表達，二者呈負向調控關係。 為了進闡明上述調控關係的分子機理，我們對可能涉及信號通路變化進行了比較分析。通過western blot及蛋白定量分析顯示，在激素抵抗前列腺癌PC3細胞中，恢復Nx3.1表達後可明顯抑制p-Akt(S473)及NF-KB活性，結果表明Nkx3.1抑制Her-2/neu通過抑制PI3K/Akt/NFκB通路來實現。 我們的研究結果初步闡明了同源框轉錄因子Nkx3.1與Her-2/neu表達、調控的內在聯繫。
