叢生蛋白對血視網膜屏障的作用及機制研究

《叢生蛋白對血視網膜屏障的作用及機制研究》是依託同濟大學，由汪浩擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：叢生蛋白對血視網膜屏障的作用及機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：汪浩
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

增生性糖尿病視網膜病變(PDR)及糖尿病性黃斑水腫（DME）是引起糖尿病患者視力下降的主要原因，而血視網膜屏障的破壞與PDR及DME的發生密切相關，目前干預治療的藥物研究較少，主要是血視網膜屏障破壞的作用機制尚未完全闡明。我們前期研究發現叢生蛋白（clusterin）在PDR患者的玻璃體中明顯下調，但其對血視網膜屏障的作用及其調控機制尚不清楚，本項目將套用RT-PCR、免疫螢光染色、明膠酶譜分析、RNA干擾等技術從體外培養的人視網膜微血管內皮細胞及糖尿病大鼠動物模型兩方面研究叢生蛋白對血視網膜屏障通透性的影響以及如何調控緊密連線蛋白及基質金屬蛋白酶的表達，從而闡明叢生蛋白對血視網膜屏障的作用及調控的分子機制，為將來防治PDR及DME提供新的思路。

結題摘要

糖尿病性視網膜病變（Diabetic retinopathy, DR）是嚴重影響患者視力的視網膜疾病。本課題組前期對DR患者的玻璃體的蛋白進行分析，結果顯示DR患者的玻璃體中叢生蛋白（Clusterin，CLU）表達水平下調。本課題研究CLU在早期DR中對血視網膜屏障 (BRB) 和神經視網膜的保護作用及機制。具體包括：CLU的來源，CLU的表達水平與視網膜血管內皮細胞間緊密連線蛋白表達及血管通透性的關係，CLU對神經視網膜細胞丟失的抑制作用，探索CLU是否可作為DR的保護因子。 結果顯示： CLU高表達於增生膜血管的內皮細胞中；CLU和DR組大鼠體重明顯低於對照組，血糖明顯高於對照組；玻璃體腔注射CLU後1d，房水中CLU的濃度2倍高於對照組 (*p＜0.05)； DR組大鼠視網膜的細胞間連線蛋白的轉錄水平明顯低於對照組（*p＜0.05），而CLU組大鼠視網膜的細胞間連線蛋白轉錄水平顯著高於DR組（*p＜0.05）；大鼠視網膜鋪片螢光染色後的Occludin/lectin相對定量結果顯示DR組大鼠的螢光強度相對值較對照組明顯降低(*p＜0.05); 而CLU組的螢光強度相對值降低程度顯著減少(*p＜0.05,)。FFA結果顯示DR組大鼠 (100%) 出現微血管異常，而CLU組只有部分大鼠 (30%)出現上述微血管改變。 ERG檢查顯示：DR組大鼠的b波值較對照組大鼠明顯降低 (*Pb1＜0.01); 而CLU組b波降低的程度顯著減少(*Pb3＜0.05); HE染色結果表明，DR組大鼠較對照組大鼠神經視網膜細胞計數減少 (*p＜0.05), 而CLU組大鼠較DR組大鼠神經視網膜細胞減少個數顯著降低 (*p＜0.05); Tunel結果顯示，DR組大鼠神經視網膜細胞存在Tunel陽性細胞 (*P＜0.05), 而玻璃體腔注射CLU後Tunel陽性細胞個數明顯減少 (*P＜0.05) 。 CLU主要來源於視網膜血管內皮細胞；外源性增加CLU可抑制糖尿病大鼠BRB的損害；，可減少糖尿病大鼠在FFA中出現高螢光點和血管迂曲等視網膜血管異常；可部分降低糖尿病大鼠的視功能損害，抑制糖尿病大鼠視網膜變薄，內外核層細胞的變少。蛋白組學發現的DR玻璃體差異蛋白CLU是DR的保護因子，可作為DR治療的新靶點。