《去miR-9作用增強靶向防齲DNA疫苗免疫效果和機制研究》是依託武漢大學，由郭繼華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：去miR-9作用增強靶向防齲DNA疫苗免疫效果和機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：郭繼華
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MicroRNA是一類重要的內源性非編碼單鏈小分子RNA，主要能抑制靶基因的表達。DNA疫苗免疫機體後在細胞中表達是引起免疫反應的基礎，其表達同樣也可受到microRNA的調控。項目組前期研究表明miR-9可以抑制靶向融合防齲DNA疫苗編碼蛋白的表達。本項目將利用microRNA的抑制劑microRNA海綿，抑制miR-9的表達，去除miR-9對靶向融合防齲DNA疫苗編碼蛋白表達的抑制作用，提高該蛋白的表達水平，從而增加對免疫系統的刺激，增強免疫效果。另外，miR-9對樹突狀細胞成熟的重要調控分子NFKB1的表達也有抑制作用。抑制miR-9也可增強NFKB1的表達，從而增強樹突狀細胞的成熟，有利於特異性免疫反應的誘導。本項目還將利用RNA測序等技術研究抑制miR-9對樹突狀細胞基因表達的影響，探索其增強免疫效果的機制。本項目將也可能為增強其它DNA疫苗的免疫效果提供新的方法。
結題摘要
齲病是人類最常見的口腔疾病之一。防齲DNA疫苗可以誘導機體產生抗齲免疫反應。如何提高疫苗免疫效果是許多DNA疫苗面臨的共同問題。microRNA是一種在進化過程中高度保守的非編碼RNA，在許多生理和疾病過程中有重要作用。microRNA的主要作用是結合靶基因並抑制靶基因的表達。DNA疫苗編碼的抗原的翻譯表達也可能受到microRNA的調控。本項目研究了是否可以通過抑制內源性miR-9的作用，提高防齲DNA疫苗編碼的抗原的蛋白表達，從而增強特異性免疫反應。本項目發現：（1）針對miR-9的海綿表達質粒，可以明顯提高防齲DNA疫苗編碼的融合蛋白抗原的表達水平,同時也可以提高miR-9的靶基因FoxO1和CDH1的表達水平。為提高海綿質粒轉染細胞的效率，我們還研發了一種新型高效的細胞轉染方法，即半貼壁法，已經申請專利。（2）在樹突狀細胞中，抑制miR-9可以提高樹突狀細胞成熟相關基因CD80的表達水平，說明miR-9在一定程度上參與了樹突狀細胞成熟的過程。（3）首次發現抑制miR-9的功能可以顯著增強防齲DNA疫苗的免疫效果，證實了本項目的關鍵科學假設，為增強DNA疫苗的免疫效果提供了很好的思路。（4）通過RNA-seq和生物信息學分析，我們發現一些非編碼RNA和免疫相關基因可能是miR-9的新的靶基因。另外，靶向防齲DNA疫苗可以ceRNA的方式增加免疫相關基因p50的表達。（5）除了miR-9，miR-144和miR-29c也可抑制防齲DNA疫苗所編碼的融合蛋白表達，從而可能影響其免疫效果。（6）RNA結合蛋白PCBP1可能對靶向防齲DNA疫苗的蛋白表達有潛在的調控作用。這些研究結果為DNA疫苗在體內的抗原表達調控機制，和增強DNA疫苗免疫效能提供了新思路。
