《利用CRISPR/Cas9快速製備瘧原蟲基因修飾模型的研究》是依託廈門大學，由袁晶擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：利用CRISPR/Cas9快速製備瘧原蟲基因修飾模型的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：袁晶
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
瘧疾每年導致全球近百萬人口的死亡，其致病寄生蟲瘧原蟲的基因功能研究至今缺乏高效工具。CRISPR/Cas9作為新型高效基因組修飾方法，成功套用於多種模式物種。我們前期工作建立了CRISPR系統的效應分子核酸酶Cas9在約氏瘧原蟲細胞的異源表達和細胞核定位；克隆了約氏瘧原蟲U6 snRNA啟動子，並且能夠驅動另一個效應分子sgRNA轉錄表達；構建了基於同源重組修復的Cas9/sgRNA/Donor載體系統，成功實現約氏瘧原蟲基因不同類型修飾，製備出內源基因Sera1和Sera2的基因敲除模型；內源基因Sep3-GFP和Sep3-Myc標籤插入模型和內源基因Hsp70核苷酸替換模型。本研究將在瘧疾生物學最常用的兩種模型（鼠約氏瘧原蟲和人惡性瘧原蟲）建立CRISPR/Cas9基因組修飾方法，快速精確製備基因敲除、標籤插入和基因替換修飾模型，為瘧原蟲基因功能揭示提供高效工具。
結題摘要
該項目建立了鼠約氏瘧原蟲的CRISPR/Cas9基因組修飾方法，能夠高效進行瘧原蟲的基因敲除、基因加標籤和核苷酸替換修飾；在此工作的基礎上，針對瘧原 蟲基因功能研究中多基因修飾的技術需求，進一步開發了多基因修飾的方法。結合耐藥標記基因的負篩選和順序修飾，能夠在瘧原蟲模型中實現多重修飾；利用Cas9方法，該項目對鼠約氏瘧原蟲的AP2家族的26個成員基因開展了基因敲除和基因標籤插入，系統分析了瘧原蟲AP2轉錄因子的功能，為理解瘧原蟲生活周期中的基因表達調控提供了一幅“全景圖”。
