《生物實驗室系列·分子免疫學實驗指南》涵蓋了目前常用的常規免疫學技術方法、分子生物學方法、生物信息學分析方法以及信號轉導研究常用的方法。除了簡單介紹各個常用實驗技術的基本原理，還根據作者長年的工作經驗，在關鍵方法或步驟中提供了注意事項，歸納和闡述了具體實驗中可能遭遇的問題和困惑，並對實驗失敗的原因給予了分析。
基本介紹
- 書名：生物實驗室系列•分子免疫學實驗指南
- 類型：醫學
- 出版日期：2008年5月1日
- 語種：簡體中文
- ISBN：9787122023674, 7122023672
- 作者：黎燕，馮健男，張紀岩
- 出版社：化學工業出版社
- 頁數：294頁
- 開本：16
- 品牌：化學工業出版社
內容簡介,圖書目錄,文摘,
內容簡介
《生物實驗室系列·分子免疫學實驗指南》適用於已經開始或正計畫使用免疫學技術進行實驗研究的本科生、研究生、科研工作者以及臨床檢驗工作者。
圖書目錄
第一部分 常用免疫學技術
第一章 蛋白質分析與純化
第一節 蛋白質濃度測定
一、Bradford法
二、Lowry法測蛋白質含量
三、紫外吸收法測蛋白質含量
第二節 蛋白質的聚丙烯醯胺凝膠電泳
第三節 Western印跡
第四節 蛋白質純化
第五節 離子交換層析
第六節 親和層析
一、谷胱甘肽親和層析
二、金屬螯合親和層析
三、Protein A、Protein G親和層析
第七節 疏水作用層析
參考文獻
第二章 抗體製備技術
第一節 多克隆抗體的製備
雙向免疫擴散法測定抗血清效價
第二節 單克隆抗體的製備
一、動物免疫
二、細胞融合技術
三、雜交瘤細胞克隆化
四、單抗亞類測定
五、單克隆抗體的大量製備
參考文獻
第三章 抗體純化和標記技術
第一節 抗體的純化
一、IgG的純化
二、IgM的純化
第二節 抗體片段的製備
一、IgG片段的純化
二、IgM片段的純化
第三節 放射性同位素標記抗體技術
一、氯胺T法
二、Iodogen法
第四節 螢光素標記抗體技術
第五節 酶標記抗體技術
第六節 生物素標記抗體技術
第七節 銪標記抗體技術
第八節 膠體金標記抗體技術
參考文獻
第四章 免疫檢測技術
第一節 免疫螢光技術
間接細胞免疫螢光技術
第二節 酶免疫技術
一、雙抗體夾心法檢測抗原
二、間接法測定抗體
三、競爭法
第三節 放射免疫技術
一、放射免疫分析
二、免疫放射分析
第四節 化學發光免疫分析技術
化學發光酶聯免疫分析
參考文獻
第五章 免疫細胞分離技術
第一節 密度梯度分離技術
第二節 黏附分離技術
第三節 磁珠分離技術
第四節 流式細胞儀分離技術
參考文獻
第六章 細胞功能檢測
第一節 細胞增殖試驗
第二節 吞噬試驗
第三節 細胞黏附試驗
第四節 抗體依賴的細胞毒試驗
第五節 補體介導的細胞毒試驗
第六節 凋亡檢測
一、細胞凋亡的形態學檢測
……
第七章 免疫組織化學和免疫電鏡
第八章 細胞因子及其活性的檢測
第二部分 與分子免疫學有關的生物信息學
第九章 生物信息學簡介
第十章 核酸與蛋白質資料庫
第十一章 序列比對分析
第十二章 核酸與蛋白質結構預測
第十三章 蛋白質相互作用理論模擬
第十四章 抗原表位預測
第十五章 免疫信息學
第十六章 免疫學相關重要Web網站的
第三部分 分子生物學技術
第十七章 基本分子生物學技術
第十八章 PCR技術
第十九章 分子文庫的構建及篩選
第二十章 分子雜交技術
第二十一章 RNAi技術
第四部分 信號轉導常用研究技術
第二十二章 信號轉導蛋白的活化水平
第二十三章 第二信使含量測定
第二十四章 亞細胞定位分析
第二十五章 蛋白蛋白相互作用分析
第二十六章 蛋白DNA相互作用分析
第二十七章 磷酸化多肽雙向作圖和磷酸
第二十八章 蛋白質組學的雙向電泳與生物質譜
第一章 蛋白質分析與純化
第一節 蛋白質濃度測定
一、Bradford法
二、Lowry法測蛋白質含量
三、紫外吸收法測蛋白質含量
第二節 蛋白質的聚丙烯醯胺凝膠電泳
第三節 Western印跡
第四節 蛋白質純化
第五節 離子交換層析
第六節 親和層析
一、谷胱甘肽親和層析
二、金屬螯合親和層析
三、Protein A、Protein G親和層析
第七節 疏水作用層析
參考文獻
第二章 抗體製備技術
第一節 多克隆抗體的製備
雙向免疫擴散法測定抗血清效價
第二節 單克隆抗體的製備
一、動物免疫
二、細胞融合技術
三、雜交瘤細胞克隆化
四、單抗亞類測定
五、單克隆抗體的大量製備
參考文獻
第三章 抗體純化和標記技術
第一節 抗體的純化
一、IgG的純化
二、IgM的純化
第二節 抗體片段的製備
一、IgG片段的純化
二、IgM片段的純化
第三節 放射性同位素標記抗體技術
一、氯胺T法
二、Iodogen法
第四節 螢光素標記抗體技術
第五節 酶標記抗體技術
第六節 生物素標記抗體技術
第七節 銪標記抗體技術
第八節 膠體金標記抗體技術
參考文獻
第四章 免疫檢測技術
第一節 免疫螢光技術
間接細胞免疫螢光技術
第二節 酶免疫技術
一、雙抗體夾心法檢測抗原
二、間接法測定抗體
三、競爭法
第三節 放射免疫技術
一、放射免疫分析
二、免疫放射分析
第四節 化學發光免疫分析技術
化學發光酶聯免疫分析
參考文獻
第五章 免疫細胞分離技術
第一節 密度梯度分離技術
第二節 黏附分離技術
第三節 磁珠分離技術
第四節 流式細胞儀分離技術
參考文獻
第六章 細胞功能檢測
第一節 細胞增殖試驗
第二節 吞噬試驗
第三節 細胞黏附試驗
第四節 抗體依賴的細胞毒試驗
第五節 補體介導的細胞毒試驗
第六節 凋亡檢測
一、細胞凋亡的形態學檢測
……
第七章 免疫組織化學和免疫電鏡
第八章 細胞因子及其活性的檢測
第二部分 與分子免疫學有關的生物信息學
第九章 生物信息學簡介
第十章 核酸與蛋白質資料庫
第十一章 序列比對分析
第十二章 核酸與蛋白質結構預測
第十三章 蛋白質相互作用理論模擬
第十四章 抗原表位預測
第十五章 免疫信息學
第十六章 免疫學相關重要Web網站的
第三部分 分子生物學技術
第十七章 基本分子生物學技術
第十八章 PCR技術
第十九章 分子文庫的構建及篩選
第二十章 分子雜交技術
第二十一章 RNAi技術
第四部分 信號轉導常用研究技術
第二十二章 信號轉導蛋白的活化水平
第二十三章 第二信使含量測定
第二十四章 亞細胞定位分析
第二十五章 蛋白蛋白相互作用分析
第二十六章 蛋白DNA相互作用分析
第二十七章 磷酸化多肽雙向作圖和磷酸
第二十八章 蛋白質組學的雙向電泳與生物質譜
文摘
第二章 抗體製備技術
第一節 多克隆抗體的製備
【原理】當將抗原注射人實驗動物體內時，抗原上不同表位（即抗原決定簇）刺激不同B細胞克隆，分化成一系列抗體生成細胞，因此，在血液中的抗體是針對抗原上不同抗原決定簇的抗體總和，稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分——抗原決定簇相結合。
將抗原導入敏感動物體內後，可刺激外周免疫器官，尤其是淋巴結和脾臟中的淋巴細胞大量增殖。如圖2.1所示，實驗動物對初免次疫和二次免疫的應答有明顯的不同。通常初免疫應答往往比較弱，尤其是針對於易代謝、可溶性的抗原。首次注射後大約7天，在血清中可以觀察到抗體但抗體的濃度維持在一個較低的水平，在大約l0天左右抗體的滴度會到最大值。但同種抗原注射而產生的二次免疫應答的結果明顯不同，和初次免疫應答相比抗體的合成速度明顯增加並且保留時間也長。
免疫應答的動山學結果取決於抗原和免疫動物的種類，但初次和二次免疫應答之間的關係是免疫應答的一個重要特點。三次或以後的抗原注射所產生的應答和二次應答結果相似，即抗體的滴度明顯增加並且血清中抗體的種類和性質發生了戰變，這種改變被稱為免疫應答的成熟，具有重要的實際意義。通常在抗原注射4～6周后會產生具有高親和力的抗體。
材料和試劑
（1）實驗動物：成年兔。
（2）實驗器材：特製兔盒，刀片，25G針頭，1ml。注射器，20mL血液收集管，藥鏟，離心機以及塑膠離心管，加樣器及加樣管，燒杯。
（3）實驗試劑
①抗原；乙醇；20mmol/l。磷酸緩衝溶液pH7 2。
②弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑。
【實驗步驟】
（1）抗原的製備：由於純化的抗原適合產生特異性抗體，因此在注射前通常呆用一些典的方法，比如柱層析、分級萃取、亞細胞分離等進行抗原的分離和純化。如果多肽抗原SDS/PAGE中為可見的單一帶，抗原從凝凝中的抽提可作為純化的最後一個步驟。
第一節 多克隆抗體的製備
【原理】當將抗原注射人實驗動物體內時，抗原上不同表位（即抗原決定簇）刺激不同B細胞克隆，分化成一系列抗體生成細胞，因此，在血液中的抗體是針對抗原上不同抗原決定簇的抗體總和，稱為多克隆抗體。多克隆抗體中不同的抗體分子可以以不同的親和能力與抗原分子表面不同的部分——抗原決定簇相結合。
將抗原導入敏感動物體內後，可刺激外周免疫器官，尤其是淋巴結和脾臟中的淋巴細胞大量增殖。如圖2.1所示，實驗動物對初免次疫和二次免疫的應答有明顯的不同。通常初免疫應答往往比較弱，尤其是針對於易代謝、可溶性的抗原。首次注射後大約7天，在血清中可以觀察到抗體但抗體的濃度維持在一個較低的水平，在大約l0天左右抗體的滴度會到最大值。但同種抗原注射而產生的二次免疫應答的結果明顯不同，和初次免疫應答相比抗體的合成速度明顯增加並且保留時間也長。
免疫應答的動山學結果取決於抗原和免疫動物的種類，但初次和二次免疫應答之間的關係是免疫應答的一個重要特點。三次或以後的抗原注射所產生的應答和二次應答結果相似，即抗體的滴度明顯增加並且血清中抗體的種類和性質發生了戰變，這種改變被稱為免疫應答的成熟，具有重要的實際意義。通常在抗原注射4～6周后會產生具有高親和力的抗體。
材料和試劑
（1）實驗動物：成年兔。
（2）實驗器材：特製兔盒，刀片，25G針頭，1ml。注射器，20mL血液收集管，藥鏟，離心機以及塑膠離心管，加樣器及加樣管，燒杯。
（3）實驗試劑
①抗原；乙醇；20mmol/l。磷酸緩衝溶液pH7 2。
②弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑。
【實驗步驟】
（1）抗原的製備：由於純化的抗原適合產生特異性抗體，因此在注射前通常呆用一些典的方法，比如柱層析、分級萃取、亞細胞分離等進行抗原的分離和純化。如果多肽抗原SDS/PAGE中為可見的單一帶，抗原從凝凝中的抽提可作為純化的最後一個步驟。
