《免疫蛋白質組學方法高通量篩選梅毒螺旋體抗原標誌物》是依託廈門大學，由劉莉莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：免疫蛋白質組學方法高通量篩選梅毒螺旋體抗原標誌物
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉莉莉
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
現有的梅毒實驗室診斷方法靈敏度和特異性低，尋找靈敏特異、能刺激機體早期產生強烈免疫應答反應的抗原標誌物，是解決此問題的關鍵。前期我們採用不同臨床階段梅毒患者血清進行免疫蛋白質組學研究，證實了免疫蛋白質組學的方法篩選梅毒抗原標誌物的可行性。本項目擬套用已建立的兔感染動物模型，採用免疫蛋白質組學和生物信息學方法高通量篩選強免疫原性的梅毒螺旋體膜蛋白；選擇候選的免疫原性膜蛋白的抗原優勢表位,製備抗原優勢表位表達的重組蛋白；進一步製備重組蛋白的免疫兔血清，採用Western-blot技術驗證重組蛋白的免疫原性和種屬特異性；採用梅毒兔感染模型篩選能激發早期免疫應答反應的膜蛋白。在獲得強免疫原性和種屬特異性、能早期刺激機體免疫應答反應的膜蛋白後，將其優勢表位基因串聯，製備嵌合重組蛋白，作為新型的梅毒抗原標誌物，有望提高實驗診斷的靈敏度和特異性，縮短視窗期，對梅毒防治具有重要意義。
結題摘要
現有的梅毒實驗室診斷方法存在著靈敏度、特異性低的缺陷，尋找靈敏特異的能刺激機體早期發生強烈免疫應答反應的抗原標誌物，是解決此問題關鍵。本項目採用不同臨床階段的梅毒患者血清進行膜蛋白免疫蛋白質組學研究，驗證了免疫蛋白質組學的方法篩選梅毒抗原標誌物的可行性，以及機體對不同抗原的免疫應答反應時相不同。建立了兔感染動物模型，獲得大量的螺旋體。採用免疫蛋白質組學和生物信息學的方法高通量篩選具有較強免疫原性的梅毒螺旋體膜蛋白；對候選的免疫原性膜蛋白的抗原優勢表位進行篩選及基因克隆、表達和純化，製備重組蛋白；共篩選了10 個具有免疫原性的蛋白（TpN15、TpN17、TpN37、TpN44.5、TpN47、TpF-1、tmp、polA、fla-A、bmp ）。進行重組蛋白的免疫血清製備和純化，採用Western-Blot技術驗證重組蛋白的免疫原性；鑑定重組蛋白的種屬特異性；採用梅毒兔感染模型評價機體對重組蛋白的應答反應。最終篩選出具有強免疫原性和高種屬特異性的梅毒螺旋體抗原標誌物的組合（TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47），建立梅毒特異性IgG抗體免疫印跡技術，該技術獲得了國家發明專利和實用新型專利授權，對梅毒的防控具有重要的意義。
