天然含氮有機化合物（如蛋白質）與濃硫酸共熱時分解出氨，氨與硫酸反應生成硫酸銨。在克氏定氮儀中加入強鹼鹼化消化液，使硫酸銨分解出氨。用水蒸氣蒸餾法將氨蒸入硼酸溶液中，然後再用標準稀硫酸酸溶液進行滴定，滴定所用稀硫酸酸的量（mol）相當於被測樣品中氨的量（mol），根據所測得的氨量即可計算樣品的含氮量。
基本介紹
- 中文名：克氏定氮法
- 原理：所測得的氨量計算樣品的含氮量
- 蛋白質含量：含氮量乘上係數6.25
- 反應過程：分為消化、蒸餾及滴定
原理,步驟,
原理
因為蛋白質含氮量通常在16%左右，所以將克氏定氮法測得的含氮量乘上係數6.25，便得到該樣品的蛋白質含量。
步驟
整個反應過程可分為消化、蒸餾及滴定三大步驟。
樣品與濃硫酸共熱時，分解出氮、二氧化碳和水，氮轉變出的氨，進一步與硫酸作用生成硫酸銨，此過程通常稱之為“消化”。
但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，並加入硫酸銅作為催化劑，以加快反應速度。以甘氨酸為例，其消化過程可表示如下：
CH2NH2COOH + 3H2SO4 → 3CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3 （1）
2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 （2）
(NH4)2SO4 + 2NaOH → 2H2O + Na2SO4 + 2NH3 （3）
反應（1）、（2）在克氏定氮燒瓶中完成。反應（3）在克氏定氮儀內進行。
濃鹼可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨。借水蒸氣將產生的氨蒸餾到定量、定濃度的硼酸溶液中，氨與溶液中的氫離子結合生成銨離子，使溶液中氫離子濃度降低。然後用標準無機酸滴定至恢復溶液中原來氫離子濃度為止。最後根據所用標準酸的摩爾數計算出待測物中的總氮量。
