《低溫電漿誘導成纖維細胞增殖促進創傷修復的機制》是依託西安交通大學，由石興民擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：低溫電漿誘導成纖維細胞增殖促進創傷修復的機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：石興民
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
近年來低溫電漿（LTP）套用於生物醫學領域成為一個新興的研究熱點。最新研究發現，LTP可促進創傷的修復過程，然而其促進機制並不清楚。我們推測LTP通過誘導創傷修復的主要細胞-成纖維細胞（FB）增殖從而促進創傷的修復。本項目以介質阻擋放電方法在大氣壓下產生氬氣LTP（射流），對體外培養的FB和小鼠皮膚創傷進行處理，研究LTP促進創傷修復的機制。首先結合體外和體內實驗確定促進創傷修復的LTP的最佳劑量。其次採用發射光譜分析確定LTP的成分，並結合NO和氧自由基清除劑的使用確定LTP中促進FB增殖的具體成分。然後採用透射電鏡觀察、流式細胞術、RT-PCR、Western blotting、電泳遷移率實驗、免疫螢光技術結合雷射共聚焦顯微鏡觀察、RNA干擾等技術，從體外實驗和體內實驗兩個層面研究LTP通過誘導FB增殖從而促進創傷修復的分子機制。本項目的完成可為LTP修復創傷的臨床套用奠定基礎。
結題摘要
背景：近年來的研究發現，低溫電漿（LTP）可促進創傷的修復過程，然而其促進機制並不清楚。本項目以介質阻擋放電方法在大氣壓下產生氬氣LTP（射流），對體外培養的成纖維細胞（FB）和小鼠皮膚創傷進行處理，研究LTP促進創傷修復的最佳劑量和機制。內容與結果：體外實驗結果顯示，LTP處理15s能夠促進FB增殖、分泌表皮生長因子和轉化生長因子以及膠原合成。電漿處理15s的細胞相對於不處理的對照，細胞質更豐富，細胞質中線粒體和內質網有明顯的增加，表明細胞處於增殖旺盛期。流式細胞術結果發現，與不處理的對照相比，15s處理組的S期細胞百分比明顯增加，而G2/M期細胞百分比明顯降低（P＜0.05）。Western blotting 結果發現，NF-κB P-p65（磷酸化的p65）和CyclinD1在處理15s時表達水平最高，與不處理的對照相比，差異都有統計學意義（P＜0.05），而IκB的表達明顯下降（P＜0.05）。RNA干擾阻斷p65表達後，檢測FB的增殖情況發現LTP並沒有促進細胞增殖，並且p65蛋白表達明顯下降，下游分子CyclinD1蛋白表達水平也明顯下降。LTP處理後，細胞內、外液ROS和NO含量都逐漸增加。活體實驗結果顯示，30s處理組的小鼠傷口癒合速度最快，在第7天基本癒合，達到陽性對照組（人重組表皮生長因子）小鼠傷口癒合效果。HE染色結果表明，30s的電漿處理劑量可以促進傷口表皮再生，肉芽組織增生和膠原沉澱。免疫螢光結果發現，與對照相比，30s的電漿處理可明顯增加傷口組織中成纖維細胞的數量，並可促進成纖維細胞分泌膠原蛋白I(COL-I)（P＜0.05）。結論：LTP通過其中的活性氧和活性氮活化NF-κB促進信號傳導，引起細胞周期調控蛋白cyclinD1表達上調，進而細胞S期合成增加，導致FB增殖，從而促進創傷修復。意義：本研究為LTP修復創傷的臨床套用奠定了理論基礎，也為此類LTP設備進一步開發提供了科學依據。
