低分化肝細胞肝癌的豪豬信號活性及上皮細胞間質轉化

項目摘要

癌症幹細胞（CSCs）的特點是對化療或放療不敏感。CD133、EpCAM和乙醛脫氫酶（ALDH）是識別上皮起源腫瘤CSCs的常用標記，CD133+/ALDH高或CD133+/EpCAM+細胞常為分化良好HCC CSC或起始亞群。然而，這些標記在大多數低分化HCC細胞中卻是陰性。我們的初步研究表明上皮細胞間質轉化（EMT）與陰性CSC標記物表達譜具有良好的相關性，而且低分化HCC特徵與EMT和豪豬（Hh）信號活性的增強直接相關。因此，本標書的目標是確定EMT、Hh信號活性與化療耐藥性、轉移之間的關係。我們的假設是EMT和Hh信號活性的增強是低分化HCC化療不敏感和轉移的重要分子機制。具體目標：1、根據CSC標記物譜將HCC細胞分成不同亞群，闡述EMT在不同肝癌細胞亞群的作用；2、闡明豪豬信號通路對調節低分化HCC細胞EMT、腫瘤進展和轉移的影響。

結題摘要

本立項旨在探索豪豬信號通路介導低分化型肝癌轉移和耐藥的分子基礎。首先，我們確定肝癌細胞表面分子CD133/EpCAM雙陰性亞群表現出低分化趨勢，呈上皮間質轉化，具有很高的豪豬信號活性。但這一亞群細胞表面標記不穩定，分選後經傳代即失去其表面分子標記譜，返回到未分選Huh-7細胞狀態。為解決這一難題，我們將Huh-7雙陰性亞群經移轉培養裝置篩選，得出高轉移Huh-7-Trans亞群。這一亞群的特點為高豪豬信號活性、高轉移及上皮間質轉化，金屬基質蛋白酶的表達水平及活性都很高，這為剖析豪豬信號通路如何調控肝癌細胞轉移特性奠定了基礎。同時，此亞群穩定細胞表面分子表達譜及生物學特性也成為研究腫瘤轉移及干預的有用工具。我們套用豪豬信號通路中關鍵分子SMO的阻止劑LDE225處理此亞群，發現對該亞群的高轉移特性有不同程度的抑制作用。特別值得關注的是豪豬信號通路轉錄因子Gli-1的剪下體tGli-1出現於Huh-7-Trans亞群中，也出現於本地高轉移的肝癌細胞株如SMCC-7721、MHCC-97H和 MHCC-97L。他人在別的系統已證實該剪下體tGli-1參與調控起轉移作用的基因，如金屬基質蛋白酶組分等。在此基礎上，為揭示豪豬信號通路與耐藥間的關係，我們還從雙陰性亞群中分選出Huh-7-DN亞群。該亞群除具有高豪豬信號水平、上皮間質轉化、穩定細胞表面標記外，表現出對索拉菲尼的高度耐藥。經檢測ABC多重耐藥基因，發現ABCC1的表達與豪豬信號通路中Gli-2轉錄因子的表達相一致。用LDE225或RNA干擾技術抑制Gli-2的表達後，ABCC1的基因表達相應下降。因此，現有的數據證實ABCC1是Gli-2的下游靶基因之一，同時也確認豪豬信號通路對該亞群耐藥特性的調控作用。為進一步揭示Huh-7-Trans和Huh-7-DN的共性與差別，特別是豪豬信號通路如何調控不同的基因群以達到對轉移及耐藥這兩個腫瘤治療中棘手難題，我們對這兩亞群做了RNA-Seq分析，除發現這兩亞群與其原始Huh-7細胞在基因表達譜有顯著差異外，已找到一個控制轉移又調控耐藥的基因，TAP1。初步的CHIP結果表明TAP1與ABCC1 均為Gli-1或Gli-2 的下流靶基因。因此，本立項揭示豪豬信號通路為肝癌轉移及耐藥的分子基礎，豪豬信號通路分子已成為肝癌的生物標記及藥物靶點。LDE225已被FDA批准為基底細胞

低分化肝細胞肝癌的豪豬信號活性及上皮細胞間質轉化

基本介紹

項目摘要

結題摘要

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