《伏隔核區lncRNA uc.84-調節古柯鹼成癮及其分子機制研究》是依託四川大學，由卜遷擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：伏隔核區lncRNA uc.84-調節古柯鹼成癮及其分子機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：卜遷
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
藥物成癮的分子生物學機制是神經科學研究熱點之一。我們首次通過高通量晶片對古柯鹼條件性位置偏好小鼠伏隔核進行了長鏈非編碼RNA (lncRNA) 篩選。發現uc.84-，一個哺乳動物中高度保守的lncRNA，表達顯著上調。進一步對uc.84-的基因組位置和Cis-/Trans-分析發現其位於轉錄因子Nurr1下游5.5kb處，並可能作為增強子促進Nurr1的轉錄。而Nurr1是多巴胺能神經元中的關鍵轉錄因子，調節多巴胺轉運蛋白、酪氨酸羥化酶等多個成癮相關基因表達。本課題擬通過uc.84- shRNA慢病毒伏隔核定位注射，RT-PCR、Western blot、動物行為學研究uc.84-對古柯鹼誘導成癮行為和神經可塑性的影響；並通過siRNA轉染、雙螢光素酶報告法等技術研究uc.84-的增強子效應。通過本項研究，有望闡明uc.84-調節古柯鹼成癮及其分子機制，為古柯鹼成癮的防治提供新策略。
結題摘要
成癮藥物的濫用和依賴引起了全球性嚴重的醫療和社會問題。近年來，ncRNA在藥物成癮和神經突觸可塑性研究中取得了很大進展，如miR-212放大CREB信號通路參與古柯鹼成癮研究等，但藥物成癮中lncRNA分子生物學機制研究方面，仍屬空白。本課題主要研究內容與結果如下：（1）建立了古柯鹼誘導CPP和自發活動模型，採用螢光定量PCR、Western blot等技術，發現古柯鹼給藥組伏隔核uc.84-和Nurr1表達水平均顯著升高，但在紋狀體、海馬和前額皮質等三個腦區的表達沒有顯著變化，表明uc.84-和Nurr1表達水平升高具有腦區特異性，僅在伏隔核區。（2）為研究伏隔核區uc.84-上調錶達在古柯鹼成癮中的作用，通過生物信息學預測和體外驗證，構建了uc.84- shRNA的慢病毒。腦定位內注射於小鼠伏隔核，觀察對古柯鹼誘導的CPP和自發活動的影響。神經行為學分析發現，伏隔核定位注射uc.84- shRNA可以顯著抑制古柯鹼的CPP獎賞效應和行為敏化效應。另外發現伏隔核定位注射uc.84- shRNA能夠降低古柯鹼誘導的DAT和TH表達的升高和樹突棘密度增加，表明uc.84-參與古柯鹼成癮與調控DAT和TH的表達有關。（3）採用螢光素酶報告基因系統研究發現，uc.84-能夠作為增強子參與Nurr1表達的調控，參與古柯鹼成癮的過程。本課題闡明了uc.84-參與古柯鹼成癮形成的分子生物學機制，從lncRNA調控的角度詮釋古柯鹼成癮的形成原因，對探索藥物成癮新的靶標具有重要意義，這將對未來古柯鹼成癮的防治提供新思路。
