《以秀麗隱桿線蟲作為寄生蟲耐藥模型的研究》是依託蘭州大學，由陳根擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：以秀麗隱桿線蟲作為寄生蟲耐藥模型的研究
- 依託單位：蘭州大學
- 項目負責人：陳根
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目通過研究抗寄生蟲藥物誘導模式生物秀麗隱桿線蟲耐藥模型，探討寄生蟲對藥物的耐藥機理及逆轉耐藥的方法。實驗研究選擇抗蠕蟲藥物阿苯達唑、甲苯咪唑、三氯苯噠唑、吡喹酮和伊維菌素等，抗瘧原蟲藥物氯喹、青蒿素和蒿甲醚等，作為誘導秀麗隱桿線蟲耐藥模型的藥物，通過藥物濃度梯度的遞增變化在一定的時間裡分別誘導這些藥物穩定的耐藥模型。通過基因測序、實時定量PCR和RNA干擾等方法檢測與耐藥有關的基因包括微管蛋白基因、Pgp蛋白基因和MDR基因的變化，分析這些藥物與耐藥基因變異的關係。同時通過秀麗隱桿線蟲耐藥模型篩選抗寄生蟲藥物聯合使用的配對方法、耐藥逆轉劑聯合抗寄生蟲藥物的配對方法和中藥耐藥逆轉劑，並通過耐藥基因的檢測，分析逆轉耐藥的機理。本課題通過秀麗隱桿線蟲耐藥模型的建立，研究寄生蟲的耐藥機制；同時通過該模型篩選有效延緩寄生蟲耐藥的藥物配對方法，篩選新的有效的寄生蟲耐藥逆轉劑。
結題摘要
通過不同濃度青蒿素和5-氟尿嘧啶作用秀麗隱桿線蟲，誘導耐藥模型，同時觀察秀麗隱桿線蟲的生存周期、繁殖及相關基因表達的變化，探討青蒿素影響秀麗隱桿線蟲生殖的機理。以小劑量青蒿素累計誘導秀麗隱桿線蟲耐藥模型；同時以致死劑量的青蒿素和致生殖缺陷的5-氟尿嘧啶處理秀麗隱桿線蟲，在體視顯微鏡下觀察線蟲的壽命以及產卵情況。提取5mM青蒿素組和20uM5-氟尿嘧啶組線蟲RNA；青蒿素組線蟲RNA反轉錄成cDNA後進行螢光定量PCR實驗，比較sec-23，lin-29和ung-1等基因表達的差異性；5-氟尿嘧啶組線蟲RNA套用數字基因譜技術進行全基因組表達譜測定，並用螢光定量PCR驗證。3mM、4 mM和5mM青蒿素組線蟲生存天數分別為5.65天，5.25天和4.65天，與正常組比較有統計學意義（P＜0.05）；各青蒿素組線蟲都沒有產卵或後代出現；5mM青蒿素組的線蟲sec-23表達下調，lin-29與ung-1表達均上調。5uM和10uM的5-氟尿嘧啶組後代數要少於對照組（P＜0.05），但比20uM的後代數要多（P＜0.05）。數字基因譜顯示，20uM 5-fu組有1147基因上調，1067基因下調；有101 genes上調基因的log2Radio值大於8，有141下調基因大於8。按照KEGG database檢索，對5-fu組不同表達基因的識別和信號通路進行了分析，發現主要有20個差異表達的基因參與TGF-beta信號通路(ko04350，Q=0.003)和ECM-receptor interaction通路(ko04512，Q=0.000067)。還有些基因參與Focal adhesion 通路（ko04510，Q=0.00004），Hypertrophic cardiomyopathy通路（ko05410，Q=0.00006）。通過real-time RT- PCR對者20個表達富集的基因進行驗證，發現有19個基因被證實表達有差異。由於誘導秀麗隱桿線蟲耐藥模型的出現周期比較長，實驗還在繼續中。結論 青蒿素能夠縮短秀麗隱桿線蟲的壽命，抑制線蟲的生殖，其機理可能與sec-23，lin-29和ung-1的調控有關。5-氟尿嘧啶可以導致秀麗隱桿線蟲出現生殖缺陷，其機理可能與參與TGF-beta和ECM-receptorinteraction等信號通路的daf-14等基因的調節有關。
