以單克隆抗體作為探針研究果膠結構與免疫活性的關係

《以單克隆抗體作為探針研究果膠結構與免疫活性的關係》是依託東北師範大學，由周義發擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：以單克隆抗體作為探針研究果膠結構與免疫活性的關係
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：周義發
• 依託單位：東北師範大學

項目摘要

果膠是一類重要的功能性多糖生物大分子，其結構與功能的關係一直是人們關注的熱點。由於結構複雜，用測定結構再研究活性的常規方法研究果膠結構與功能關係較為困難。因此，本項目擬用單克隆抗體為探針研究果膠分子結構與免疫活性的關係。研究內容包括：（1）探索合適的條件，用已知人參果膠分子製備系列單克隆抗體，並鑑定抗體的表位；（2）從具有較好免疫活性的中藥和植物中分離篩選出100種以上果膠分子，研究它們的免疫活性；（3）研究單克隆抗體與這些果膠分子相互作用，分析這種作用與免疫活性的關係，從而找出果膠分子的結構特徵與免疫活性的關係。本項目研究結果不僅對探討活性果膠結構有重要意義，也為研究果膠結構與活性關係這個糖生物學的難題提供了新的思路，同時，對果膠的實際套用也具有指導作用。

結題摘要

果膠是一類結構複雜的多糖類物質，其結構與功能關係研究比較困難。單克隆抗體是近年來用於研究多糖結構特徵的一種潛在工具。本項目利用單克隆抗體作為探針，結合化學法、生物法及儀器分析法研究果膠的結構及其與免疫活性的關係。首先利用不同的人參果膠作為抗原，通過免疫大鼠，獲得了六種果膠單克隆抗體，分別命名為JIM16、LM19、LM20、LM5、LM16和RU1，並對抗體的表位及效價進行檢測。這些抗體依次識別AG型果膠、未酯化的HG型果膠、高酯化的HG型果膠、RG-I型果膠的Gal側鏈、RG-I型果膠的Ara側鏈及RG-I型果膠的主鏈。利用溶劑提取和柱層析組合法等從多種植物中分離純化了近100種結構均一的果膠結構域。通過部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析、高效液相色譜、紅外光譜、核磁共振譜分析，並利用製備的單克隆抗體鑑定，將這些果膠結構域分別歸屬為AG型、HG型、RG-I型及HG-RG-I共存型果膠。然後進一步測定不同類型果膠分子對小鼠免疫細胞增殖情況的影響、對巨噬細胞吞噬能力、產生NO能力及生成細胞因子能力的影響。結果表明不同類型果膠的免疫活性不同，其活性順序為AG型果膠＞RG-I型果膠＞RG-I+HG型果膠＞HG型果膠。本項目的研究結果不僅為果膠的結構研究提供了新的方法，也為多糖活性機理研究提供了新的思路，對多糖的理論研究和實際套用都具有重要的意義，對糖生物學發展起到積極的促進作用。項目執行期間獲得1項省級自然科學一等獎，發表7篇SCI論文，參加2次國際會議，4次國內會議，申請2項國內發明專利，培養3名博士研究生，6名碩士研究生。