《人參皂甙Rd抗腦缺血興奮性毒性損傷的NMDA受體機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由趙鋼擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：人參皂甙Rd抗腦缺血興奮性毒性損傷的NMDA受體機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：趙鋼
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
人參皂甙Rd（Rd）是從人參或三七中提取的活性單體皂苷。我們主持的隨機、雙盲、安慰劑對照的多中心臨床研究發現，Rd對急性缺血性腦卒中有顯著療效。近期我們動物實驗發現，Rd具有顯著的抗大鼠腦缺血興奮性毒性損傷作用，可抑制NMDA誘導的鈣內流及其受體電流，提示Rd可能通過作用於NMDA受體發揮神經保護作用。結合皂甙類似物可結合到NMDA受體亞基上的相關調節位點、NMDA受體NR2B亞基是興奮性毒性主要參與者的報導，我們提出假說：Rd抗腦缺血興奮性毒性的機制可能與其結合NR2B亞基上的關鍵調節位點有關。本研究擬採用鈣成像、電生理、細胞轉染等技術，以傳統藥理學方法與現代基因干預手段相結合，在NMDA受體、亞基及調節位點三個層面探索Rd的作用靶點，並在整體動物上進行驗證，為Rd成為治療缺血性腦卒中的I類新藥提供理論依據，並為其他中藥單體的藥理學研究及類似抗腦缺血興奮性毒性類神經保護劑的研發提供思路。
結題摘要
人參皂甙Rd（Rd）是從人參或三七中提取的活性單體皂苷。我們主持的隨機、雙盲、安慰劑對照的多中心臨床研究發現，Rd對急性缺血性腦卒中有顯著療效。近期我們動物實驗發現，Rd具有顯著的抗大鼠腦缺血興奮性毒性損傷作用，可抑制NMDA誘導的鈣內流及其受體電流，提示Rd可能通過作用於NMDA受體（NMDAR）發揮神經保護作用。結合類似皂甙可結合到NMDA受體亞基上的相關調節位點及NMDA受體NR2B亞基是興奮性毒性的主要參與者的報導，我們提出假說：Rd抗腦缺血興奮性毒性的機制可能與其結合NR2B亞基上的關鍵調節位點有關。 為此，本項目在國家自然科學基金（No. 81371365）資助下開展了以下工作：（1）探索Rd對NMDAR正常功能的影響；（2）研究Rd對NMDAR電流的作用特點；（3）研究Rd是否選擇性作用於NMDAR亞基；（4）研究Rd調控NMDAR亞基的可能位點。利用培養的大鼠皮層神經元和動物腦缺血損傷模型，採用全細胞膜片鉗技術並結合藥物與基因干預等手段，取得了以下重要結果：（1）Rd不影響正常培養神經元的電生理特性，但可減少正常及損傷神經元的NMDAR電流；（2）Rd選擇性影響突觸外NMDAR-NR2B亞基介導的NMDAR電流；（3）Rd不直接作用於NMDAR；（4）Rd抑制損傷後NMDAR-NR2B亞基S1303位點的磷酸化；（5）Rd通過抑制DAPK激酶影響NMDAR-NR2B亞基S1303位點的磷酸化；（6）Rd通過促進DAPK的磷酸化抑制DAPK活性；（7）Rd通過抑制磷酸化酶Calcineurin，調控DAPK活性；（8）Rd可模擬Calcineurin抑制劑CsA發揮神經保護作用。 基於以上研究結果，我們首次提出Rd神經保護的新機制：Rd通過抑制磷酸化酶Calcineurin，提高DAPK的磷酸化，從而使之活性降低；這可降低突觸外NMDAR-NR2B亞基S1303位點的磷酸化水平，從而降低NMDAR介導的電流，減少Ca2+內流，從而發揮神經保護作用。因此，我們完成了本項目所有工作計畫，揭示Rd神經保護可能性機制，為Rd治療缺血性腦卒中的臨床套用提供了科學依據。
