人博卡病毒體內外培養體系的構建

《人博卡病毒體內外培養體系的構建》是依託武漢大學，由鄧幼平擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：人博卡病毒體內外培養體系的構建
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：鄧幼平
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

人博卡病毒(human bocavirus , HBoV) 是細小病毒科的一個新成員。HBoV的易感人群多為嬰幼兒急性呼吸道感染的病例，其感染多發生在秋冬季節。HBoV的感染可以單獨存在，也可以和其他病毒混合感染。主要臨床表現為咳嗽、流涕、氣喘、呼吸困難和發熱，以高熱為主，陣發性咳嗽較為突出。本項目立足於和博卡病毒同科的其他病毒的培養經驗，嘗試探索人博卡病毒的培養方法，並進一步構建出穩定可行的動物模型。採用已建立的螢光定量PCR的方法來進行成果驗證,從而為博卡病毒的深入研究提供實驗基礎。

結題摘要

人博卡病毒(human bocavirus 1, HBoV) 是從嬰幼兒的呼吸道感染樣本中檢測到的一種新的細小病毒，是繼細小病毒B19後發現與人類疾病有關的細小病毒成員。人博卡病毒成員包括：HBoV1-HBoV4。HBoV1的易感人群多為嬰幼兒急性呼吸道感染的病例，在呼吸道分泌物中HBoV1的檢出率為1.5%-24.6%。HBoV1可單獨感染，也可以與其他病毒混合感染；其感染的臨床症狀主要表現為咳嗽、發熱並伴有哮喘。本項目採用TaqMan探針實時定量PCR方法（TaqMan PCR）和微滴式數字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）的方法檢測湖北武漢地區兒科住院病例的鼻咽分泌物中HBoV1的感染，並嘗試探索人博卡病毒的體內外培養方法及致病機制，為人博卡病毒的深入研究提供實驗基礎。通過所建立的TaqMan PCR方法對收集到的214例住院患兒的咽拭子標本進行檢測，結果顯示HBoV1感染的陽性率為3.74%。採用ddPCR方法檢測182例住院患兒咽拭子標本，結果顯示ddPCR方法檢測到HBoV1定量限低至0.5copies/μl，HBoV1感染的陽性率為8.24%；使用TaqMan PCR方法檢驗，陽性率為3.30%。選取HBoV1絕對定量高的陽性樣本製備病毒除菌液，感染多種細胞系及膠質瘤細胞系，在試驗細胞中未出現相關變化；將含有中間大片段(缺少ITR)的HBoV1基因組克隆WHL-1轉染膠質瘤細胞系，未檢測到HBoV1 DNA的複製；將HBoV1病毒除菌液製備成氣溶膠感染小鼠，無相關感染現象出現。本研究表明採用TaqMan PCR和ddPCR方法檢測住院患兒鼻咽分泌物中HBoV1的感染率分別為3.74%和8.24%，微滴式數字PCR（ddPCR）對鼻咽分泌物中HBoV1的檢測限、準確性和重複性更有優勢，且不受樣品基質和擴展效率的影響；膠質瘤細胞系非人博卡病毒的敏感細胞系；人博卡病毒分子兩端的ITR序列對病毒侵染細胞發揮重要功能；製備人博卡病毒的感染性克隆對研究其生物學特性和致病分子機制有重大作用。