二至丸保肝的體內效應成分及其協同作用機制研究

《二至丸保肝的體內效應成分及其協同作用機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由王婧雯擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：二至丸保肝的體內效應成分及其協同作用機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：王婧雯
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

藥物性肝損傷（DILI）是亟待解決的嚴重公共衛生問題，我們前期研究表明：二至丸能夠有效地防治DILI的發生與發展，但其保肝的多靶點協同作用及其機制尚不清楚。我們提出基於方劑體內效應成分協同關係的多靶點整合協同作用機制研究新思路。擬採用HPLC-MS/MS法，研究二至丸的體內多成分協同關係及其藥動學特徵，探索其配伍內涵的物質基礎；擬採用DILI動物模型，觀察二至丸及其多成分的保肝協同作用，建立時-量-效關係模型和成分-分布-效應關係模型，探索其配伍內涵的保肝協同作用；從整體、器官、細胞、分子水平，研究二至丸抑制或阻抗DILI的炎性反應和調節機體免疫系統紊亂的作用機制，探索其保肝的多靶點整合協同作用機制。本研究結果對於闡明二至丸防治DILI的物質基礎及作用機理具有重要實用價值，為臨床套用提供科學依據；對於探索方劑配伍內涵具有重要的理論意義和科學價值。

結題摘要

目的：研究二至丸體內效應成分的協同保肝作用機制。方法：從整體、器官、細胞、分子等水平，分析二至丸體內效應成分的協同保肝作用機制。結果：⑴ 明確了二至丸在大鼠體內的多種效應成分紅景天苷、特女貞苷、蟛蜞菊內酯。⑵ 完成了二至丸保肝作用的時-量-效關係研究，明確了二至丸具有急性肝損傷保護作用，最佳的給藥劑量為400 mg/kg，且在造模24h後發揮最大藥效。⑶ 二至丸組分拆方研究發現，女貞總苷提取物能夠顯著降低肝損傷小鼠肝臟組織中MDA含量，同時提高SOD、GSH-Px兩種抗氧化酶活性；蟛蜞菊內酯提取物能夠顯著抑制小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6三種炎症因子水平。⑷ 研究二至丸主要效應成分對CCl4致小鼠急性肝損傷模型的多靶點保肝作用機制，發現蟛蜞菊內酯能夠抑制CCl4引起炎症相關蛋白COX-2和i NOS 表達上調，降低ERK磷酸化以及NF-κB 細胞質轉移至細胞核，增加JNK磷酸化；同時，能夠使Bax 及 active Caspase-3 表達明顯減少，Bcl-2 表達顯著增加。特女貞苷能夠明顯降低MDA含量，提高SOD和GSH-Px活力，同時，能夠提升肝細胞核Nrf2及GCLC、HO-1、NQO1的蛋白表達，這些抗氧化物降低了肝臟細胞中氧化自由基。⑸ 研究二至丸體內主要效應成分體外肝細胞損傷的保護作用，發現蟛蜞菊內酯可減少細胞內ROS的釋放，使Nrf2的表達由細胞質向細胞核轉移明顯增加，且HO-1和GCLC表達均升高，進一步研究發現蟛蜞菊內酯在體外能夠刺激ERK、JNK磷酸化。結論：二至丸主要有效成分蟛蜞菊內酯和特女貞苷具有抗炎、抗凋亡、抗氧化等多靶點協同保肝作用：蟛蜞菊內酯發揮保肝作用機制可能與其抑制NF-κB由細胞質向細胞核轉移、ERK磷酸化、增加JNK磷酸化的抗炎作用，以及上調Bcl-2和下調Bax及caspase3的抗凋亡主要而有關；蟛蜞菊內酯在體外對H2O2所致肝細胞氧化損傷具有明顯的保護作用，提高細胞生存率，其作用機制可能為通過ERK、JNK通路調節Nrf2，進而調節HO-1/GCLC的表達，從而發揮對肝細胞損傷的保護作用。特女貞苷能夠激活肝細胞Nrf2通路，通過調節Nrf2及其下游的GCLC、HO-1、NQO1表達發揮抗氧化作用，減輕CCl4引起的氧化性肝損傷。