《乳酸乳球菌中耐酸相關sRNA及其結合蛋白相互作用的研究》是依託天津大學，由李艷妮擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：乳酸乳球菌中耐酸相關sRNA及其結合蛋白相互作用的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李艷妮
- 依託單位：天津大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
前期研究結果表明，表達耐酸基因可以提高乳酸乳球菌的耐酸能力及乳酸鏈球菌素(nisin)的生產能力。本課題組利用深度測序技術獲得了高產nisin的乳酸鏈球菌F44在酸應激下顯著差異上調錶達的58個sRNA，但其功能及作用機制尚不清楚。本課題嘗試套用RT-PCR技術檢測候選sRNA在酸應激後的表達情況。然後進一步過表達或缺失候選sRNA，檢測其對菌株耐酸能力的影響。進行轉錄組測序分析，初步確定乳酸乳球菌耐酸相關sRNA及其靶基因。本課題的工作為理解乳酸乳球菌的耐酸調控網路並以此為基礎構建人工的耐酸調控網路來提高nisin生產能力奠定基礎。
結題摘要
表達耐酸基因可以提高乳酸乳球菌的耐酸能力及乳酸鏈球菌素(nisin)的生產能力。課題以乳酸乳球菌F44在酸脅迫條件下獲得的sRNA 深度測序結果為基礎，對58個在酸應激下顯著差異上調錶達的sRNA進行qRT-PCR驗證，篩選得到19個在酸脅迫下表達量明顯上調的sRNA。根據篩選得到的候選sRNA基因，設計合成引物，通過PCR方法進行克隆，並通過構建穿梭表達載體，轉化到乳酸乳球菌F44中進行過量表達，通過產酸能力和Nisin效價的變化分析過表達菌株對酸耐受性的影響，得到多個酸脅迫下表達量明顯上調的sRNA，即s004，s013，s015，s042，s144，s263，c263。使用三種不同的靶標線上預測軟體TargetRNA2、IntaRNA和Starpicker對以上sRNA進行靶標的篩選，並採用eGFP融合蛋白的方法進行了sRNA的靶標驗證，分析討論了sRNA與靶標mRNA之間的相互作用。本課題的工作為理解乳酸乳球菌的耐酸調控網路並以此為基礎構建人工的耐酸調控網路來提高nisin生產能力奠定基礎。
