下調VGLL3基因治療類風濕關節炎

《下調VGLL3基因治療類風濕關節炎》是依託上海交通大學，由戴生明擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：下調VGLL3基因治療類風濕關節炎
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：戴生明
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

RA因其發病機制複雜，阻斷TNF或IL-6等單一通路皆有約1/3患者療效不佳。新近發現VGLL3能直接調控IL-7、ICAM-1、BAFF、MMP-9、Ets-1等靶基因的表達，既往研究表明這些靶基因的產物參與RA的發病機制，提示下調VGLL3將可抑制IL-7、ICAM-1、MMP-9、Ets-1的表達，從而達到一石多鳥地治療RA。我們擬採用免疫組化和免疫印跡證明RA滑膜表達VGLL3，致炎因子可上調其表達；採用定量PCR、流式細胞術、免疫印跡、ELISA，在培養的滑膜成纖維細胞中，闡明siRNA抑制VGLL3表達可減低IL-7、ICAM-1、MMP-9表達；VGLL3過表達可增高它們的表達。並闡明細胞內轉導機制。為抗VGLL3抗體治療RA提供初步依據。

結題摘要

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis, RA)是以慢性滑膜炎症和骨侵蝕(骨吸收亢進、骨形成障礙)為特徵，最終導致關節畸形。本項目旨在研究轉錄輔因子Vgll3(Vestigial-like 3)在RA病理機制中的作用，以探索潛在的RA治療新靶點。本課題首先採用免疫組織化學分析了RA、骨關節炎(OA)以及正常滑膜組織中Vgll3蛋白的表達情況；採用定量PCR分析了RA、骨關節炎(OA)滑膜成纖維細胞中Vgll3的表達水平。結果發現Vgll3在RA滑膜組織及滑膜成纖維細胞中均有表達，且表達水平明顯高於正常對照，並輕度高於OA。採用siRNA敲低Vgll3，結果顯示敲低Vgll3對IL-7、IL-7R和ETS-1的基因表達水平無明顯作用。採用病毒轉染使Vgll3在RA滑膜成纖維細胞中過表達，然後採用基因晶片研究了Vgll3對RA滑膜成纖維細胞基因表達譜的調節作用，結果顯示過表達Vgll3誘發RA滑膜成纖維細胞中357個基因上調，690個基因下調，功能學分析提示Vgll3參與了免疫、代謝和炎症反應等多種生物學過程。過表達Vgll3不影響滑膜成纖維細胞的遷移能力，但抑制了侵襲能力，且該作用與抑制MMP1和MMP9表達有關。此外，分別採用人臍帶來源間充質幹細胞(MSC)和人誘導多能幹細胞(hiPSC)在體外建立成骨細胞分化模型，結果證明二者均能被成功誘導分化為成熟的成骨細胞，且在分化成熟過程中二者均有Vgll3的表達顯著上調。17β-雌二醇(E2)可促進成骨分化，但對Vgll3的表達無影響；IL-17A輕度抑制成骨分化，且輕度抑制Vgll3的表達。TGF-β1可以抑制成骨分化，且抑制Vgll3的表達，該作用由TGF-β1誘導的SMAD3磷酸化所介導。結論，RA滑膜成纖維細胞Vgll3的表達升高，但不調節IL-7、IL-7R和ETS-1的表達。過表達Vgll3可通過抑制MMP1和MMP9表達，從而抑制滑膜成纖維細胞的侵襲能力。在成骨細胞分化成熟過程中Vgll3的表達上調，IL-17A輕度抑制成骨分化，且輕度抑制Vgll3的表達；TGF-β1通過SMAD3通路抑制Vgll3的表達，從而抑制成骨細胞分化。通過這些研究，有助於認識Vgll3在RA滑膜炎症中的作用及機制，有助於認識Vgll3在RA誘發的骨吸收/骨形成失平衡中的作用及機制。