《下調RhoC表達對多發性骨髓瘤血管生成的影響及機制研究》是依託鄭州大學，由陳奎生擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：下調RhoC表達對多發性骨髓瘤血管生成的影響及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳奎生
- 依託單位：鄭州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
RhoC與腫瘤浸潤轉移關係的研究已有較多文獻報導，近年研究表明其還參與血管新生的全過程。我們前期研究發現RhoC在多發性骨髓瘤（MM）細胞中高表達，同時也表達於MM血管內皮細胞中，且與MM血管生成密切相關。那么調控RhoC表達，體外是否對血管內皮細胞增殖、偽足形成、遷移和成管能力產生影響？體內是否影響MM移植瘤生長和瘤體血管生成？其可能機制是什麼？本項目擬通過調節血管內皮細胞中RhoC表達，體外觀察對血管內皮細胞增殖、偽足形成、遷移和成管能力的影響；下調RhoC表達後體內對移植瘤生長、瘤細胞增殖和血管生成的影響，並探討其潛在機制；分離、鑑定和原代培養MM血管內皮細胞，以傳代培養的HUVEC為對照，觀察調節血管內皮細胞RhoC表達後，對MM RPMI 8226細胞增殖、細胞周期及侵襲能力的影響，並探討其可能機制。為開展以腫瘤內皮細胞為靶點的腫瘤治療奠定理論基礎。
結題摘要
為探討RhoC表達與多發性骨髓瘤血管生成的關係及其可能機制。我們在測RhoC在MM組織、RPMI8226細胞及HUVECs中表達的基礎上，構建RhoC shRNA質粒和慢病毒載體，轉染骨髓瘤血管內皮細胞（MVECs）和HUVECs；採用WB和RT-PCR測細胞中RhoC表達情況；鬼筆環肽進行骨架染色，螢光共聚焦顯微鏡觀察細胞骨架；掃描電鏡觀察內皮細胞偽足形態和數量；劃痕實驗測細胞遷移能力；基質膠上觀察細胞成環能力；微載體觀察細胞出芽數目；WB和RT-PCR測ROCK和MAPK表達情況；轉染MVECs及HUVECs，收集內皮細胞培養上清液培養RPMI8226細胞；WB和RT-PCR測RPMI8226-S組RhoC表達；CCK-8法測細胞增殖；小室測細胞侵襲能力；流式細胞術測細胞周期；WB測PI3K、CDK、CyclinD1、MMP2、9蛋白表達。建裸鼠移植瘤模型，WB和RT-PCR測移植瘤RhoC表達含量；計數基質膠內VEGF誘導新生血管數；免疫細胞化學測移植瘤組織中Ki-67、CD31表達。結果顯示：轉染MVECs和HUVECs內RhoC表達均降低，RhoC S組較NC組細胞骨架規則、絲狀偽足數目明顯減少；RhoC S組較NC組細胞遷移能力明顯降低，二維成管數目以及出芽數目和能力降低；RhoC S組較NC組細胞ROCK和MAPK表達明顯降低；條件培養後RPMI8226細胞中RhoC表達降低；RPMI8226-S組較NC組細胞增殖、侵襲能力降低，處於S期的細胞比例降低；RPMI8226-S組較NC組PI3K、CDK、CyclinD1、MMP2及MMP9等蛋白表達含量均出現降低；RPMI8226-S組較NC組基質膠內VEGF誘導的新生血管數下降，移植瘤中RhoC蛋白和mRNA表達含量降低，Ki-67、CD31表達降低。結果表明：下調MVECs中RhoC表達，可影響MVECs的骨架和偽足形成，抑制血管內皮細胞血管格線管狀結構形成和出芽能力；其機制可能與RhoC/ROCK、RhoC/MAPK通路有關；下調 MVECs中RhoC表達可下調RPMI8226內RhoC表達，影響RPMI8226的細胞周期，增殖和侵襲能力；其機制可能與PI3K/Akt、CDK/CyclinD1、MMP2/MMP9通路相關。體內實驗，下調RPMI8226的RhoC可抑制MM細胞增殖，降低移植瘤血管新生
