《上皮-間質轉化在肝前體細胞組織學發生中作用的研究》是依託南昌大學，由鄧歡擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：上皮-間質轉化在肝前體細胞組織學發生中作用的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：鄧歡
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
基於肝前體細胞（HPCs）的治療策略在用於臨床實驗前仍存諸多難題，它的組織學發生機制是其中最重要也是最具爭議的一個。胚胎幹細胞和骨髓造血幹細胞來源假說都不能很好的闡述HPCs的生物學行為。結合現有證據及本課題組前期研究結果，我們提出全新的HPC組織學發生假說：HPCs代表一類正在進行上皮-間質轉化（EMT）的細胞。本項目通過雷射捕獲顯微切割獲得並檢測人B肝相關肝病和小鼠CDE卵圓細胞模型組織中HPCs與EMT相關標記物表達關係，並通過TGF-β培養體外分離的HPCs、肝細胞和膽管上皮細胞，觀察三者形態及免疫表型的改變和異同點。並將上述細胞移植到CCL4急慢性肝損傷小鼠模型，觀察它們對肝修復及纖維化的影響。本項目旨在探索EMT參與HPCs發生的可能性及調控機制，為HPCs調控的分子機制研究及細胞治療策略奠定理論依據。
結題摘要
項目的背景：終末期B肝相關肝病（肝硬化及肝癌）的治療缺乏有效手段。肝前體細胞（HPCs）的發現為臨床治療提供了全新思路，但仍然面臨諸多難題。其組織學發生機制是其中最重要也是最具爭議的一個。越來越多的研究結果表明上皮-間質轉化（ EMT）可能在HPC組織學發生中發揮重要作用。膽鹼缺乏-乙硫氨酸(CDE)小鼠模型造模第3天即出現肝星狀細胞活化和I型膠原沉積，至第7天才檢測到HPC增殖，說明特定的間質環境可能是HPC活化的前提。HPC還能過度表達與纖維化關係密切的neurexin家族成員：CNTNAP2。其次，處於特定階段的HPC能表達間質細胞標記物，並且將其植入慢性損傷的肝臟後，可使修復速度顯著增加15。而轉化生長因子β（transforming growth factor-beta1, TGF-β）能促使體外培養的成體肝細胞和膽管上皮細胞發生特徵性的EMT形態和基因表型的改變（1.細胞粘附性下降；2.上皮標記物表達下降且間質標記物表達上升）。與此同時，在這些細胞內還可檢測到HPC標記物的表達。基於前期研究結果，我們提出全新假說：HPC代表的是一群正在進行EMT或逆轉過程（MET）的細胞。 主要研究內容：A. 利用雙重免疫螢光標記觀察EMT的發生與HPC的活化是否有時間及空間上的關聯性；不同時期HPC內EMT相關標記物的表達變化是否與EMT特性吻合；B. 透射電鏡探查組織中HPC與周圍上皮細胞或間質細胞是否存在直接空間關係；C. 通過體外TGF-β細胞培養，觀察HPC、肝細胞和膽管上皮細胞能否具有間質細胞形態、遷徙能力及免疫表型，EMT相關標記物表達變化情況是否與經典EMT理論吻合；D. 經過TGF-β培養的HPC、肝細胞和膽管上皮細胞移植入急慢性肝損傷模型後，對肝臟修復及纖維化的發生是否能起到不同的作用。 重要結果：A.證實在B肝相關肝病中，HPC與膽管上皮細胞及中間型肝細胞存在直接連線；B.證實在B肝相關肝病中，HPC內EMT相關標記物表達與其增殖有密切關係。 關鍵數據及其科學意義：A.電鏡顯示HPC與膽管細胞和中間型肝細胞有直接的連線，表明HPC可能代表一種出於成熟膽管細胞和肝細胞之間的狀態；B.膽管上皮細胞內EMT和HPC標記物的表達具有密切聯繫，表明炎症可能促使膽管上皮細胞發生EMT轉變。
