三聚氰胺檢測試劑盒

三聚氰胺試劑盒採用間接競爭ELISA方法，在酶標板的微孔條上預包被偶聯抗原，當樣品加入到各個微孔中後，樣品中殘留的三聚氰胺和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗三聚氰胺抗體，加入酶標二抗後，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺的含量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中三聚氰胺的含量。

基本介紹

• 中文名：三聚氰胺試劑盒
• 外文名：melamine detection kit
• 作用：三聚氰胺檢測

特點

使用三聚氰胺試劑盒通過酶聯免疫吸附試驗方法測定三聚氰胺的含量時，最後進行結果分析時，通常採用的都是定量分析方法，從而得到每一份牛奶樣品中含有三聚氰胺的具體數值，具有較高的準確度和可靠性。

三聚氰胺試劑盒檢測是一種敏感性高、特異性強、重複性好的檢測方法，具有操作簡便、分析速度快、靈敏度高、樣品容量大、樣品前處理簡單、儀器化成本低和分析成本低等優點，是目前最理想的殘留篩選性分析方法之一。

步驟

三聚氰胺試劑盒定量測定三聚氰胺殘留。先將三聚氰胺酶標記物，樣品及標準加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。在30min的孵育過程中，樣品中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺 抗體，孵育30min後洗掉小孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。在配製的洗液清洗結束後，每孔中加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。孵育30min後加入終止液(鹽酸)，終止底物反應，在450nm波長檢測吸光度值。根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的吸光度值得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

注意事項

試劑盒選擇

在實際檢測中發現，一般在試劑盒說明書中列出以下指標：最低檢測限；回收率；交叉反應率；標準曲線圖譜及數據，標準曲線至少由5個濃度組成；IC50測定值及變形曲線點數目，是比較規範的試劑盒，可以選擇。

試劑盒保存

試劑盒通常是在2~8℃的條件下保存，不要冷凍，使用前將試劑盒從冰櫃中取出於室溫條件下回溫，待回溫至室溫後方可使用，試劑盒在室溫條件下放置時間最好不要超過24h，所以應將沒有使用完的試劑盒及時地放回冰櫃中保存，將不用的酶標板微孔條放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。另外，不要使用過了有效日期的試劑盒，也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會導致靈敏度的降低，同樣地，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

檢測時注意事項

（1）室溫及試劑盒的溫度條件

室溫及試劑盒的溫度條件室溫最好在25℃左右，試劑盒應提前從冰櫃中取出於室溫條件下回溫，待回溫至室溫後方可使用。若室溫低於20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的吸光值(OD值)偏低。

（2）加樣

先加標準品或樣本置相對應的微孔中，注意每加一個標準品或樣本必須更換吸頭；再加入後面的各試劑時，吸頭不能靠在板孔壁上，要懸空加入，以防止交叉污染；吸取各試劑或樣本時，注意準確性，防止少加、漏加而影響測定結果。

（3）洗板

無洗板機時建議使用多孔加樣器或多孔洗滌瓶，觀察吸頭是否安裝牢固，以確保每孔加入的洗滌工作液相同；同樣地，加洗滌液時吸頭不能靠在板孔壁上，要懸空加入，以防止交叉污染；不要漏洗板孔。整個操作過程不要讓板孔乾燥，洗板後應立即進行下一步操作，不要中斷實驗去從事其他事情，因為在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況，則會出現標準曲線不成線性、重複性不好的現象，所以洗板拍乾後應立即進行下一步操作。此步的操作關係到測定結果的準確度和重複性。

（4）顯色

在顯色反應過程中，由於板孔中含有兩種或兩種以上試劑，所以加樣完成後需在桌上做圓周運動以混勻，混勻時要注意防止孔內的液體濺出。在加入底物液A和底物液B後，顯色了規定的時間後，若顏色較淺，可以適當地延長顯色反應時間，但延長時間不得過長，一般不超過10min。

試劑盒評價

一般試劑盒從靈敏度、特異性、準確度、可重複性、檢出限、耐變性、批間變異等方面來評價。

李霜等選取一種市售三聚氰胺ELISA檢測試劑盒，評價此試劑盒，結果表明該試劑盒在測試範圍內線性回歸良好，相關係數R為0.9864，與三聚氰酸、三聚氰酸一醯胺、三聚氰酸二醯胺、頭孢曲松鈉、土黴素的交叉反應率均低於0.1%，液態奶和乳粉的基體交叉反應率分別為89.09%和110.86%，液態奶和乳粉的平均回收率分別為102.4%和72.2%，液態奶和乳粉的檢測限分別為7.93、20.77μg/L，可以滿足國家相關限量標準檢測要求。耐變性的變異係數為18%，液態奶和乳粉的批間變異係數分別在11.71%~16.13%和9.13%~13.26%。該試劑盒有較好的準確性、特異性與重複性,耐變性與批間變異均在可接受範圍內，可用於液態奶、乳粉樣品中的三聚氰胺殘留檢測。謝體波等為驗證北京勤邦生物技術有限公司生產的三聚氰胺ELISA 檢測試劑盒的檢測效果。用酶聯免疫法對牛奶、奶粉、雞肉和雞蛋等4 種樣品中三聚氰胺的殘留量進行檢測，並與高效液相色譜法進行對照。結果表明：該試劑盒對4 種樣品的最低檢測限分別為19.22、46.86、51.64、21.38 μg/kg，試劑盒板內板間變異係數均小於10%； 對4 種樣品做加標回收試驗，其回收率均在95%~120%之間，變異係數均小於10%；該方法與高效液相色譜法檢測實際樣品的陰、陽性判斷結果一致。該方法穩定、可靠，可滿足食品中三聚氰胺殘留快速檢測的需要。