三型分泌系統開關蛋白SepD調控效應蛋白輸出的分子機制

三型分泌系統開關蛋白SepD調控效應蛋白輸出的分子機制

《三型分泌系統開關蛋白SepD調控效應蛋白輸出的分子機制》是依託廈門大學,由王岱擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

  • 中文名:三型分泌系統開關蛋白SepD調控效應蛋白輸出的分子機制
  • 項目類別:面上項目
  • 項目負責人:王岱
  • 依託單位:廈門大學
項目摘要,結題摘要,

項目摘要

三型分泌系統(T3SS)廣泛存在於革蘭氏陰性菌,是細菌攻擊宿主細胞的一種入侵武器,其功能缺失抑制細菌對宿主的侵染、但不影響菌體生長。T3SS特異性小分子抑制劑對細菌既無生存選擇壓力、又能降低其致病性,克服了傳統抗生物素易誘發耐藥菌群的弊端,有望成為一種全新抗菌藥物。本研究旨在深入闡明T3SS的分子作用機理,為研發該類新藥提供指導。我們前期研究發現,T3SS開關蛋白SepL/SepD對系統中效應蛋白的有序輸出至關重要,且效應蛋白的兩種不同分泌信號受開關蛋白的不同調控,因此推測SepD與效應蛋白的分泌信號/伴侶蛋白CesT通過相互作用、調節後者的有序性分泌。本項目擬以免疫共沉澱結合質譜、螢光標記示蹤等技術來確認SepD的結合蛋白,追蹤SepD/SepL在細胞內的精細定位,並揭示開關蛋白對效應蛋白分泌信號的識別作用規律,為通過干擾T3SS治療細菌感染、克服抗生素耐藥提供理論依據和新型靶標。

結題摘要

三型分泌系統(T3SS)廣泛存在於革蘭氏陰性菌,是細菌攻擊宿主細胞的一種入侵武器,其功能缺失抑制細菌對宿主的侵染、但不影響菌體生長。T3SS 特異性小分子抑制劑對細菌既無生存選擇壓力、又能降低其致病性,克服了傳統抗生物素易誘發耐藥菌群的弊端,有望成為一種全新抗菌藥物。本研究旨在深入闡明T3SS 的分子作用機理,為研發該類新藥提供指導。本項目擬以免疫共沉澱結合質譜、螢光標記示蹤等技術來確認SepD 的結合蛋白,追蹤SepD/SepL 在細胞內的精細定位,並揭示開關蛋白對效應蛋白分泌信號的識別作用規律,為通過干擾T3SS 治療細菌感染、克服抗生素耐藥提供理論依據和新型靶標。我們的研究發現:1.在腸出血性大腸桿菌 (EHEC)中,氨基端分泌信號(NSS)的輸出是由其胺基酸序列決定的,mRNA的鹼基序列並不能決定其分泌能力;2.T3SS 開關蛋白 SepD 對系統中效應蛋白的有序輸出至關重要,且效應蛋白的伴侶蛋白結合區域(CBD)分泌信號受開關蛋白 SepD 的特殊調控,進而發現 SepD 能與效應蛋白的伴侶蛋白 CesT 結合,調節效應蛋白的有序性分泌; 3.SepD與CesT的結合除了能夠直接調控效應蛋白的分泌,同時也可以調控SepL蛋白的表達。我們的結果確認了在EHEC中,效應蛋白擁有兩種獨立的分泌信號,即NSS和CBD;同時我們也初步揭示了一系列SepD結合蛋白,並深入研究了SepD蛋白與其中的關鍵蛋白CesT相互作用的具體位點及其機制。這些線索將為新一代抗菌藥物/三型分泌系統抑制劑提供潛在的作用靶點和相關信息。

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