《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》是安慶乘風製藥有限公司於2016年6月7日申請的發明專利，該專利申請號為2016103961476，公布號為CN105891371A，專利公布日為2016年8月24日，發明人是王大沖、馬繼紅、郭廷富、張曦。
《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》公開了麥當乳通顆粒的質量檢測方法，與2016年6月之前的已有標準相比，該質量檢測方法中補充了黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩的高效液相含量測定方法，提高了產品質量的可控性。
2020年7月17日，《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》獲得安徽省第七屆專利獎優秀獎。
（概述圖為《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》的摘要附圖）
基本介紹
- 中文名：一種麥當乳通顆粒的檢測方法
- 公布號：CN105891371A
- 公布日：2016年8月24日
- 申請號：2016103961476
- 申請日：2016年6月7日
- 申請人：安慶乘風製藥有限公司
- 地址：安徽省安慶市岳西縣長寧工業區
- 發明人：王大沖、馬繼紅、郭廷富、張曦
- 代理機構：南昌新天下專利商標代理有限公司
- 代理人：薛端石
- Int.Cl.：G01N30/02(2006.01)I；G01N30/90(2006.01)I
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
產後缺乳或乳汁分泌不足是產婦產後常見病，1992年中國國務院批准的《90年代中國兒童發展規劃綱要》以及1995年國務院頒布的《中國營養改善行動計畫》中明確提出，嬰兒出生後純母乳餵養4~6月者必須達到40%，母乳餵養率須達到16%~34.4%。乳汁量不足是其主要原因之一，據一項關於北京市母嬰同室嬰兒母乳餵養情況追訪分析顯示，因乳汁量不足而導致產後1個月內及其以後母乳餵養失敗者占34.39%。因此，為產後缺乳患者提供有效的治療藥物，尤其是促進產後乳汁分泌的增加，改善缺乳症狀，滿足嬰兒餵養的需要，具有非常重要的意義。
麥當乳通顆粒是一種有效的治療產後缺乳疾病的中成藥，具有益氣、養血、通乳的功能，用於產後氣血虛弱所致缺乳或無乳，其中藥成分是黃芪、當歸、麥冬、天花粉、禹州漏蘆、王不留行、小通草，功效在於使乳腺泡導管擴大增生，腺葉間脂肪結締組織減少，增加泌乳量和血清泌乳素的含量。由於該藥物主要用於產婦產後通乳，由於用藥過程涉及到嬰兒餵養，該藥物的有效性、安全性更顯關鍵。
截至2016年6月，麥當乳通顆粒的已有標準涉及黃芪、當歸、麥冬、天花粉的定性鑑別以及當歸中阿魏酸的含量測定，為有效控制生產過程的質量、保證產品的療效，需要研究設計出能夠更全面、準確測定麥當乳通顆粒中有效成分的檢測方法。
發明內容
專利目的
《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》的目的是克服2016年6月之前技術的不足，提供一種麥當乳通顆粒的質量檢測方法，完善其質量標準，加強該藥物的質量可控性，保證患者服用的有效性、安全性。
技術方案
《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》的目的是由以下技術方案實現的：
該發明的特點在於：所述麥當乳通顆粒的原料藥組成為：黃芪20-50份、當歸20-50份、麥冬20-50份、天花粉20-50份、禹州漏蘆15-45份、王不留行10-30份、小通草10-30份。所述製備方法包括以下步驟：
（2）當歸包合物的製備：取當歸粗粉加水蒸餾，蒸餾液用氯化鈉鹽析後，取乳白色渾濁液，用環糊精製成包合物；
（3）麥當乳通清膏製備：取黃芪、麥冬、小通草等六味中藥飲片粗粉和蒸餾後的當歸藥渣加水煎煮3次，合併煎液，過濾，即得；
（4）制粒：取取蔗糖粉、糊精，置噴霧乾燥制粒機內混勻，噴麥當乳通清膏，進行制粒，加入粉碎後當歸包合物混勻進行乾法制粒，乾壓、整粒過篩。
所述麥當乳通顆粒的質量檢測方法，其特徵在於：
（1）鑑別：
黃芪的鑑別：取該藥品3-10克，加甲醇30-70毫升，超聲0.5-2小時，濾過，濾液置中性氧化鋁柱上，用30%-50%甲醇100-200毫升洗脫，洗脫液置水浴上蒸乾，殘渣加水5-20毫升，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次5-20毫升，合併正丁醇液，用氨試液10-20毫升洗滌，棄去氨試液，正丁醇提取液置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇0.5毫升-2毫升使溶解，作為供試品溶液。取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1毫升中含1毫克的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與黃芪甲苷對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點，紫外燈（365納米）下顯相同的橙黃色螢光斑點。
當歸的鑑別：取該藥品10-30克，加乙醚60-100毫升，加熱回流1-3小時，濾過，濾液揮乾，殘渣加甲醇1-3毫升使溶解，作為供試品溶液，另取當歸對照藥材1克，加乙醚30毫升振搖，放置10分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15微升、對照藥材溶液5微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，用石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9:1）為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈（365納米）檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
麥冬的鑑別：取該藥品10-30克，加水30-80毫升，加熱溶解，加鹽酸1-3毫升，加熱煮沸5-20分鐘，放冷，用乙醚10-30毫升振搖提取，分取乙醚液，揮乾，殘渣加乙醚1-3毫升使溶解，作為供試品溶液，另取麥冬對照藥材1克，加水30毫升，加熱提取10分鐘，濾過，濾液加鹽酸1毫升，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5微升，對照藥材溶液2微升分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（4:1）為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
天花粉的鑑別：取該藥品3-10克，加甲醇10-30毫升，超聲處理30-50分鐘，濾過，蒸乾，殘渣加乙醇10-30毫升，溫浸3～4小時，並時時振搖，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取瓜氨酸對照品，加50%乙醇製成每1毫升含0.5毫克的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10微升、對照品溶液1微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯酚-水（5:2）為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
（2）含量測定
1）阿魏酸的含量測定：
色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；用甲醇-水-冰醋酸（30:70:1.5）為流動相；檢測波長為322納米，理論板數按阿魏酸峰計算應不低於2000。 對照品溶液的製備：精密稱取經五氧化二磷減壓乾燥24小時的阿魏酸對照品適量，加甲醇製成1毫升中含5微克的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備：取裝量差異下該藥品，混勻取約3克，精密稱定，置100毫升具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-甲酸（95:5）25毫升，稱定重量，超聲處理1小時，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45微米）濾過，取續濾液，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入液相色譜儀，測定，即得。該藥品含當歸以阿魏酸（C10H10O4）計，不得少於0.035毫克/克。
2）黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩的含量測定
色譜條件：色譜柱選用DiamonsilODS-C18色譜柱（5微米，250毫米×4.6毫米）；乙腈為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫；流速為1.0毫升/分鐘；柱溫：室溫；進樣量：20微升，檢測波長為268納米，理論塔板數按照黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩峰計算應不低於5000。
對照品溶液的製備：精密稱取黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩三種對照品適量，分別加入甲醇後配製成1毫克/毫升的待測溶液，即得。
供試品溶液的製備：取裝量差異下該藥品，混勻取約3克，精密稱定，置100毫升具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25毫升，稱定重量，超聲處理1小時，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45微米）濾過，取續濾液，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入液相色譜儀，測定，即得。該藥品含黃芪以黃芪甲苷計，不得少於0.041毫克/克，含麥冬以6-甲醯基沿階草酮甲計，不得少於0.027毫克/克，含禹州漏蘆以α-三聯噻吩計不得少於0.012毫克/克。
改善效果
《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》的有益效果：該發明所要解決的技術問題在於提供完善的質量標準，以提高產品質量的可控性。本發明質量標準中建立了黃芪中黃芪甲苷、麥冬中6-甲醯基沿階草酮甲以及禹州漏蘆中α-三聯噻吩的含量測定方法。通過本發明的質量控制，提高了產品穩定性，有利於工業化生產的質量控制。
附圖說明
圖1是實施例6中的試驗樣品含量測定結果圖，其中，1為α-三聯噻吩，2為6-甲醯基沿階草酮甲，3為黃芪甲苷。
圖2是實施例6中三種標準品的高效液相色譜圖，其中，1為α-三聯噻吩，2為6-甲醯基沿階草酮甲，3為黃芪甲苷。
技術領域
《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》屬於藥物分析技術領域，具體涉及一種麥當乳通顆粒的質量檢測方法。
權利要求
1.《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》的特徵在於：包括對黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩的高效液相含量測定方法，具體方法如下：色譜條件：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫；檢測波長為268納米，理論塔板數按照黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩峰計算應不低於5000；所述梯度洗脫為：0-30分鐘：10%-20%乙腈；30-60分鐘：20%-24%乙腈；60-90分鐘：24%-30%乙腈；90-100分鐘：30%-34%乙腈；對照品溶液的製備：精密稱取黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩三種對照品適量，分別加入甲醇後配製成1毫克/毫升的對照品溶液，即得；供試品溶液的製備：取裝量差異下該藥品，混勻取約3克，精密稱定，置100毫升具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25毫升，稱定重量，超聲處理1小時，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
2.根據權利要求1所述的麥當乳通顆粒的檢測方法，其特徵在於所述麥當乳通顆粒原料藥組成為：黃芪20-50份、當歸20-50份、麥冬20-50份、天花粉20-50份、禹州漏蘆15-45份、王不留行10-30份、小通草10-30份，其製備方法包括以下步驟：
（1）粉碎：將黃芪、當歸、麥冬、天花粉、禹州漏蘆、王不留行、小通草粉碎成粗粉備用；
（2）當歸包合物的製備：取當歸粗粉加水蒸餾，蒸餾液用氯化鈉鹽析後，取乳白色渾濁液，用環糊精製成包合物；
（3）麥當乳通清膏製備：取黃芪、麥冬、小通草等六味中藥飲片粗粉和蒸餾後的當歸藥渣加水煎煮3次，合併煎液，過濾，即得；
（4）制粒：取蔗糖粉、糊精，置噴霧乾燥制粒機內混勻，噴麥當乳通清膏，進行制粒，加入粉碎後當歸包合物混勻進行乾法制粒，乾壓、整粒過篩。
3.根據權利要求1所述的麥當乳通顆粒的檢測方法，其特徵在於，所述色譜條件中，流速為0.8-1.2毫升/分鐘，柱溫為25-35℃。
4.根據權利要求1所述的麥當乳通顆粒的檢測方法，其特徵在於，所述色譜條件中進樣量為20微升。
5.根據權利要求1所述的麥當乳通顆粒的檢測方法，其特徵在於，包括下述檢測方法中的一種或多種：
（1）黃芪的鑑別：取該藥品3-10克，加甲醇30-70毫升，超聲0.5-2小時，濾過，濾液置中性氧化鋁柱上，用30%-50%甲醇100-200毫升洗脫，洗脫液置水浴上蒸乾，殘渣加水5-20毫升，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次5-20毫升，合併正丁醇液，用氨試液10-20毫升洗滌，棄去氨試液，正丁醇提取液置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇0.5毫升-2毫升使溶解，作為供試品溶液；取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1毫升中含1毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13:7:2的10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與黃芪甲苷對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點，紫外燈365納米下顯相同的橙黃色螢光斑點；
（2）當歸的鑑別：取該藥品10-30克，加乙醚60-100毫升，加熱回流1-3小時，濾過，濾液揮乾，
殘渣加甲醇1-3毫升使溶解，作為供試品溶液，另取當歸對照藥材1克，加乙醚30毫升振搖，放置10分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15微升、對照藥材溶液5微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，用石油醚30～60℃-乙酸乙酯9:1為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈365納米檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；
（3）麥冬的鑑別：取該藥品10-30克，加水30-80毫升，加熱溶解，加鹽酸1-3毫升，加熱煮沸5-20分鐘，放冷，用乙醚10-30毫升振搖提取，分取乙醚液，揮乾，殘渣加乙醚1-3毫升使溶解，作為供試品溶液，另取麥冬對照藥材1克，加水30毫升，加熱提取10分鐘，濾過，濾液加鹽酸1毫升，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液5微升，對照藥材溶液2微升分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮4:1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
（4）天花粉的鑑別：取該藥品3-10克，加甲醇10-30毫升，超聲處理30-50分鐘，濾過，蒸乾，殘渣加乙醇10-30毫升，溫浸3～4小時，並時時振搖，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取瓜氨酸對照品，加50%乙醇製成每1毫升含0.5毫克的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10微升、對照品溶液1微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯酚-水5:2為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
（5）阿魏酸的含量測定：色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；用甲醇-水-冰醋酸30:70:1.5為流動相；檢測波長為322納米，理論板數按阿魏酸峰計算應不低於2000；對照品溶液的製備：精密稱取經五氧化二磷減壓乾燥24小時的阿魏酸對照品適量，加甲醇製成1毫升中含5微克的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備：取裝量差異下該藥品，混勻取約3克，精密稱定，置100毫升具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-甲酸95:525毫升，稱定重量，超聲處理1小時，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜0.45微米濾過，取續濾液，即得；測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10微升，注入液相色譜儀，測定，即得。
實施方式
- 實施例1
一種麥當乳通顆粒，其原料藥組成為：黃芪225克、當歸225克、麥冬225克、天花粉225克、禹州漏蘆150克、王不留行112.5克、小通草112.5克、蔗糖粉600克，採用如下的生產工藝製備獲得：
（1）粉碎：將當歸等七味飲片粉碎成粗粉，備用。
（2）當歸包合物的製備：取當歸粗粉加8倍水蒸餾3～4小時，蒸餾液用33.6千克氯化鈉鹽析後放置24小時，取乳白色渾濁液，用15.75千克β-環糊精（當歸用量的5%），以31.5千克的20%乙醇為溶媒，置膠體磨中研磨15分鐘，冷風吹乾製成包合物，備用。
（3）麥當乳通顆粒清膏製備：取黃芪、麥冬、小通草等六味中藥飲片粗粉和蒸餾後的當歸藥渣，分別加8倍量水煎煮3次，每次1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.15±0.02（90℃熱測），即得。
（4）制粒：取蔗糖粉（過80目篩）、糊精，置噴霧乾燥制粒機內混勻，噴麥當乳通清膏，進行制粒，加入粉碎後當歸包合物混勻進行乾法制粒，乾壓、整粒過篩（過10目至40目篩）。
（5）混合：將合格顆粒投入三維運動混合機混合30分鐘，待均勻後抽樣檢測，合格後分裝。
- 實施例2
黃芪的鑑別：取實施例1所製備的麥當乳通顆粒7克，加甲醇50毫升，超聲1小時，濾過，濾液置中性氧化鋁（8克，100～200目，10～15毫米內徑）柱上，用40％甲醇150毫升洗脫，洗脫液置水浴上蒸乾，殘渣加水10毫升，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次10毫升，合併正丁醇液，用氨試液15毫升洗滌，棄去氨試液，正丁醇提取液置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇0.5毫升使溶解，作為供試品溶液。取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每1毫升中含1毫克的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（SOP-QFF-003）試驗，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與黃芪甲苷對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點，紫外燈（365納米）下顯相同的橙黃色螢光斑點。
- 實施例3
當歸的鑑別：取實施例1所製備的加乙醚80毫升，加熱回流1小時，濾過，濾液揮乾，殘渣加甲醇1毫升使溶解，作為供試品溶液，另取當歸對照藥材1克，加乙醚30毫升振搖，放置10分鐘，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（SOP-QFF-003）試驗，吸取供試品溶液15微升、對照藥材溶液5微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，用石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9:1）為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈（365納米）檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
- 實施例4
麥冬的鑑別：取實施例1所製備的13克，加水50毫升，加熱溶解，加鹽酸1毫升，加熱煮沸5分鐘，放冷，用乙醚20毫升振搖提取，分取乙醚液，揮乾，殘渣加乙醚1毫升使溶解，作為供試品溶液，另取麥冬對照藥材1克，加水30毫升，加熱提取10分鐘，濾過，濾液加鹽酸1毫升，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法（SOP-QFF-003）試驗，吸取供試品溶液5微升，對照藥材溶液2微升分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（4:1）為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
- 實施例5
天花粉的鑑別：取該藥品3克，加甲醇10毫升，超聲處理30分鐘，濾過，蒸乾，殘渣加乙醇10毫升，溫浸3～4小時，並時時振搖，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取瓜氨酸對照品，加50%乙醇製成每1毫升含0.5毫克的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（SOP-QFF-003）試驗，吸取供試品溶液10微升、對照品溶液1微升，分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯酚-水（5:2）為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
- 實施例6
黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩的含量測定
實驗儀器：電子天平（萬分之一、十萬分之一）、容量瓶、A克ilent1100型高效液相色譜系統；
對照品：黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩，以上標準品均購於中國藥品生物製品檢定所。
對照品溶液的製備：精密稱取黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩三種對照品適量，分別加入甲醇後配製成1毫克/毫升的待測溶液，即得。
供試品溶液的製備：取裝量差異下該藥品，混勻取約3克，精密稱定，置100毫升具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25毫升，稱定重量，超聲處理1小時，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45微米）濾過，取續濾液，即得。
流動相的選擇考察:本實驗過程中選擇了四種流動相系統，以甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%冰醋酸、乙腈-0.1%磷酸溶液分別進行梯度洗脫實驗。取上述對照品和樣品溶液由微孔濾膜0.45微米濾過後，精密吸取各10µL，注入高效液相色譜儀進行梯度洗脫程式最佳化。結果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液流動相系統的實驗所確定的梯度程式能夠使各色譜峰信息較多，基線分離，峰型對稱，分離較好，且保留時間適中（參見圖1、2），因而最終選擇乙腈-0.1%磷酸溶液流動相系統進行梯度洗脫。
色譜條件：色譜柱選用DiamonsilODS-C18色譜柱（5微米，250毫米×4.6毫米）；乙腈為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B，梯度洗脫；流速為1.0毫升/分鐘；柱溫：室溫；進樣量：20微升。檢測波長為268納米，理論塔板數按照黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩峰計算應不低於5000，所述梯度洗脫參見表1。
時間（分鐘） | 流動相A | 流動相B |
|---|---|---|
0 | 10 | 90 |
10 | 15 | 85 |
20 | 19 | 81 |
30 | 20 | 80 |
40 | 22 | 78 |
50 | 23 | 77 |
60 | 24 | 76 |
70 | 26 | 74 |
80 | 28 | 72 |
90 | 30 | 70 |
95 | 32 | 68 |
100 | 34 | 66 |
計算公式：含量
式中，CR為對照品的濃度；AX為供試品的峰面積或峰高；AR為對照品的峰面積或峰高；CX為供試品的濃度。該藥品含黃芪以黃芪甲苷計，不得少於0.041毫克/克，含麥冬以6-甲醯基沿階草酮甲計，不得少於0.027毫克/克，含禹州漏蘆以α-三聯噻吩計不得少於0.012毫克/克。
- 實施例7
方法學考察
A線性關係考察分別精確吸取黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩的對照品稀釋液，進樣量分別為2、4、8、12、16微升，依次注入高效液相色譜儀。按照實施例6的色譜條件測定峰面積。以進樣量（x，微克）為橫坐標，峰面積積分值（y）為縱坐標，繪製標準曲線。各對照品的回歸方程、相關係數及線性範圍見下表2。
對照品 | 回歸方程 | 相關係數r | 線性範圍 |
|---|---|---|---|
黃芪甲苷 | y=61.273x+149.54 | 0.9997 | 0.357-4.780 |
6-甲醯基沿階草酮甲 | y=27.163x+120.18 | 0.9985 | 0.680-12.085 |
α-三聯噻吩 | Y=23.587x+180.06 | 0.9963 | 0.299-5.978 |
B重複性試驗
對同一批重量差異項下的供試品5份，按照實施例6所述的供試品溶液製備方法平行製備，進樣後測定黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩的峰面積積分值，計量黃芪甲苷、6-甲醯基沿階草酮甲、α-三聯噻吩含量（微克/克），結果見表3。
C精密度試驗
取B項下重複性試驗的同一瓶供試品溶液，按照實施例6色譜條件連續進樣5次，測定峰面積並計算RSD，結果見表3，該儀器精密度良好。
D穩定性試驗
取B項下重複性試驗的同一瓶供試品溶液，在12小時內取0、3、6、9、12測定各對照品的含量，測定峰面積並計算RSD值，結果見表3，供試品溶液在12小時內基本穩定。
E加樣回收率試驗
精密稱取約3克的樣品5份，取0.5克，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入上述各對照品適量。測定各對照品含量並計算回收率。各對照品平均回收率結果見表3。
成分 | RSD/%（n=5） | 回收率（n=5） | |||
重複性 | 精密度 | 穩定性 | 平均回收率/% | RSD/% | |
黃芪甲苷 | 1.6 | 0.5 | 0.1 | 103.5% | 1.5 |
6-甲醯基沿街草酮甲 | 0.9 | 0.2 | 0.4 | 99.8% | 0.4 |
a-三聯噻吩 | 0.6 | 0.9 | 1.2 | 100.2 | 1.6 |
F含量測定
採用實施例6所述的含量測定方法，測定三批麥當乳通顆粒的含量，結果見表4。
序號 | 成分 （毫克/克） | 批號 | ||
20140927 | 20141831 | 20141230 | ||
1 | 黃芪甲苷 | 0.048 | 0.046 | 0.045 |
2 | 6-甲醯基沿街草酮甲 | 0.028 | 0.030 | 0.029 |
3 | a-三聯噻吩 | 0.015 | 0.017 | 0.014 |
榮譽表彰
2020年7月17日，《一種麥當乳通顆粒的檢測方法》獲得安徽省第七屆專利獎優秀獎。
